Поверхностный кариес: Поверхностный кариес: симптомы, лечение, профилактика

Кариес

Содержание

Поверхностный кариес, Лечение кариеса в стадии пятна в Санкт-Петербурге

На сегодняшний день кариес стоит первым в списке самых распространенных стоматологических заболеваний. Его развитие в большинстве случаев является следствием пренебрежения гигиеной ротовой полости. Появление на поверхности зубной эмали пятен различного цвета – от белого до бурого или черного – свидетельствует именно о начальной стадии развития кариозного процесса.

При появлении таких симптомов стоматологи санкт-петербургского центра Dental Clinic рекомендуют не терять времени и сразу же обратиться за помощью, так как лечение начального кариеса не требует великих усилий и финансовых затрат, чем в случае заболевания на более поздних стадиях.

Лечение кариеса на стадии пятна

Зубная эмаль под воздействием кислот, которые образуются в результате жизнедеятельности бактерий, присутствующих в зубном налете, постепенно теряет прочность. Она приобретает пористую структуру и покрывается белыми пятнами. Со временем ее окрас темнеет. При этом структура поверхности эмали не изменяется и остается гладкой, поэтому избавиться от кариеса на этой стадии можно, применяя неинвазивные методы лечения.

Так как причина образования кариозных пятен кроется в вымывании из зубной эмали кальция, лечение должно быть направлено на восстановление ее минерального состава (реминерализацию).

Для реминерализующей терапии в центре Dental Clinic используются современные препараты, содержащие в больших концентрациях ионы кальция и фтора. При регулярном применении они достаточно быстро дают положительные результаты.

После завершения курса восстановительной минеральной терапии необходимо:

поддерживать гигиену ротовой полости на должном уровне;
соблюдать режим питания;
регулярно посещать стоматолога для снятия зубных отложений и профилактического осмотра.

Лечение поверхностного кариеса

При отсутствии реминерализующей терапии кариес со стадии пятна переходит в следующую стадию – поверхностный кариес (см.

фото). На этом этапе происходит разрушение эмали зуба с образованием кариозной полости. В этом случае избежать хирургического вмешательства не удастся.

В центре Dental Clinic эту процедуру проводят совершенно безболезненно и максимально эффективно. Лечение поверхностного кариеса ведется с использованием современного оборудования, обезболивающих препаратов и реставрирующих материалов.

Процедура избавления от кариеса в этой стадии проводится в несколько этапов:

устранение мягкого и твердого налета, осевшего на поверхности зубной эмали, с помощью специальных абразивных паст и щетки;
удаление участков эмали, пораженных кариозными процессами;
подготовка очищенных полостей, включая протравливание их поверхности специальными кислотами, бондинг- обеспечивающий наилучшее скрепление поверхности кариозной полости с реставрационным материалом;

восстановление целостности зубной эмали с помощью современных светополимеризующихся реставрационных материалов;
полировка зуба.

Следует помнить, что кариес поверхностный (начальный) без должного лечения может перерасти в среднюю стадию, поэтому специалисты Dental Clinic советуют своим пациентам регулярно проходить профилактический осмотр.

Поверхностный кариес (эмали)

Поверхностный кариес – кариозное поражение, при котором патологический процесс затрагивает только эмаль зуба и не распространяется на дентинную часть. Возникает кариозный очаг в деминерализованных участках, после начального кариеса в стадии белого пятна.

Кариес эмали – распространенное заболевание, встречается у большей части населения, начиная с младших дошкольников (2–3 лет), заканчивая взрослым населением (встречается чаще у женщин в период беременности и лактации).

Причины возникновения поверхностного кариеса

Недостаточная гигиена ротовой полости приводит к образованию мягкого налёта и зубного камня, которые активируют вредоносные бактерии Streptococcus. В процессе жизнедеятельности микроорганизмы выделяют токсины и кислоты. Воздействие органических кислот на эмалевую поверхность приводит к вымыванию минеральных веществ (кальция и фтора) и образованию белых очагов деминерализации (обратимое начальное кариозное поражение). Если не устранить причину возникновения, на месте белых пятен образуются кариозные очаги, затрагивающие эмалевый слой.
Заболевания организма, которые приводят к изменению количества слюны и её свойств.

Общие:

Несбалансированное питание, преобладание углеводов в рационе.
Недостаток кальция, фтора и других витаминов и микроэлементов в организме.
Недостаток фтора в питьевой воде.
Неблагоприятное воздействие окружающей среды на организм.
Наследственная предрасположенность и другие.

Кариес — симптомы и локализация поверхностного поражения эмали

Во время приема кислой, сладкой, солёной, а также горячей и холодной пищи возникает кратковременная боль в пораженном участке. После прекращения воздействия раздражителя боль быстро проходит, поэтому часто пациенты списывают такую реакцию на повышенную чувствительность зубов.

Во время самостоятельного осмотра дома можно увидеть очаг поражения. Кариозный очаг выделяется на фоне здоровой эмали пятном желто–серого или темно–коричневого цвета с неровными краями и шероховатой поверхностью.

Часто поверхностный кариес поражает шейку зуба, так как там чаще скапливается микробный налёт. Из-за налёта можно сразу не заметить дефект эмали, он станет виден только после проведения профессиональной чистки у стоматолога.

Эмаль в пришеечной зоне тонкая, поэтому в ответ на механическое воздействие (во время чистки зубов жесткой щеткой) могут наблюдаться дискомфорт и чувствительность этой области.

Также поверхностный кариес поражает контактные поверхности передних и жевательных зубов и естественные углубления жевательной зоны моляров (фиссуры). Остатки пищи застревают в глубоких ямках и их сложно удалить во время обычной чистки, поэтому часто возникает фиссурный поверхностный кариес.

Диагностика

Посещать стоматолога нужно не реже 2 раз в год для проведения профилактического осмотра и профессиональной чистки.

Кариозный очаг выявляет стоматолог во время тщательного осмотра с помощью стоматологического зеркала и зонда. Зондирование не доставляет болевых ощущений пациенту, проводится для определения глубины поражения. Поверхностный кариозный очаг находится в пределах эмали, не затрагивая дентина.

Поверхностный кариес эмали в межзубном пространстве трудно определить во время обычного осмотра, поэтому может потребоваться рентгенологического обследование.

В стоматологии Дента-АРС для качественной диагностики и лечения есть всё необходимое: современное рентгенологическое оборудование и большой практический опыт наших стоматологов-терапевтов. Уютная обстановка, доброжелательный персонал и индивидуальный подход к каждому пациенту сделает ваш визит в стоматологию приятной процедурой. Помните, что своевременное обращение к стоматологу – залог здоровья ваших зубов.

Запись на консультацию к врачу ведётся на этом сайте и по телефону клиники +7 (495) 795 98 –52.

Поверхностный кариес — симптомы, причины и лечение в стоматологии

Поверхностный кариес — симптомы, причины и лечение в стоматологии | АктивСтом

Кариес представляет собой одно из самых распространенных зубных заболеваний, которое без должного лечения способно разрушить зубы и причинить нестерпимую боль. Кариес делится на несколько стадий, каждая из которых имеет набор своих отличительных характеристик, но сегодня мы поговорим именно о поверхностном кариесе, его особенностях и способах лечения.

Поверхностный кариес: Что это такое?

Поверхностный кариес представляет собой дефект полостного типа, которой локализуется в пределах зубной эмали и не переходит в глубинные слои зуба.

Поверхностный кариес является предшественником среднего кариеса, который в свою очередь поражает средний слой дентина, что при лечении способно доставить неприятные ощущения, в связи с необходимостью более инвазивного воздействия на зуб. Поверхностный кариес встречается преимущественно у детей, и гораздо реже у взрослых.

Заболевание может прогрессировать с разной скоростью — от нескольких месяцев, до нескольких лет. Независимо от скорости прогрессирования поверхностного кариеса, его невозможно остановить консервативными методами, а единственно эффективный метод 100% борьбы с ним заключается в механическом вмешательстве со стороны стоматолога.

Поверхностный кариес: Особенности

Поверхностный кариес имеет следующие особенности, такие как:

Поверхностный кариес без оказания стоматологического лечения является необратимым процессом, который всегда ведет к полному разрушению зуба, с сильными болевыми ощущениями;

Поверхностный кариес, не перешедший в кариес средний, не причиняет пациенту болевых ощущений и может оставаться незамеченным многие месяцы, и даже годы;
При должном уходе за ротовой полостью, развитие поверхностного кариеса можно замедлить путем регулярной чистки пораженного участка зуба лечебными зубными пастами и бальзамами. Данный метод лишь замедляет трансформацию поверхностного кариеса в кариес средний. Средний кариес не поддается замедлению с помощью ухода за зубом, и тут уже действительно требуется неотложный визит к стоматологу, так как в дальнейшем начнутся сильные боли.

Поверхностный кариес: Лечение

Лечение поверхностного кариеса достаточно простое и зачастую не вызывает сильных болевых ощущений даже без анестезии. В целом, лечение поверхностного кариеса проводится следующими способами, такими как:

Под местной анестезией проводится обработка кариозной полости с помощью бормашины, после чего стоматолог накладывает пломбу;
Лечение поверхностного кариеса препаратом ICON — это промежуточное звено между профилактикой и минимально инвазивным лечением. Инфильтрация материалом высокой текучести позволяет на ранней стадии остановить развитие кариеса на контактных и гладких поверхностях зубов.

Обратный звонок

Запись на прием к врачу

Запись на прием

Запись по акции

Обратный звонок

Задать вопрос

Оставить отзыв

Обратный звонок

Поверхностный кариес, лечение поверхностного кариеса зубов

Своевременно вылечить поверхностный кариес необходимо для здоровья и красоты и вашей улыбки. Стоматология «МастерДент» предлагает заказать услуги по лечению от опытных стоматологов с высокой квалификацией. Мы используем современные техники лечения и материалы первоклассного качества. Наша клиника — это комфортабельные помещения, оборудованные передовым оснащением и удобствами для посетителей.

При поверхностном кариесе кариозное поражение одного или нескольких зубов находится в пределах эмалево-дентинного соединения. Кариозные образования являются одними из наиболее частых стоматологических проблем, поэтому очень важно обнаружить и предупредить развитие болезни до начала осложнений. В нашей клинике для диагностики используются передовые технические устройства, которые позволяют увидеть кариозный очаг на очень ранних стадиях и успешно устранить его.

Устранение проблемы, как правило, производится за одно посещение, в ходе которого устраняется как одиночное, так и множественное поражение эмали. Работа с верхними слоями эмали обычно не доставляет болевых ощущений, но в нашей клинике во избежание возможного дискомфорта во время процедуры пациентам предлагается качественная анестезия.

Традиционное лечение проходит в несколько этапов:

профессиональная гигиена;
препарирование дефекта;
закладка пломбировочного материала в цвет эмали для закрытия поверхностного кариеса в проблемном месте;
шлифовка пломбы, подгон под прикус.

В некоторых случаях (например, при наличии толстого слоя эмали) возможна сошлифовка эмалевого слоя и последующим фторированием. Лечение подбирается индивидуально для каждого пациента. При наличии иных жалоб из стоматологической области возможны показания и к другим работам. Например, для восстановления эстетики можно изготовить съемные нейлоновые зубные протезы, а для отбеливания — прибегнуть к технологии ZOOM 4.

Стоматология «МастерДент» приглашает заказать услуги опытных стоматологов в Санкт-Петербурге. Чтобы узнать больше информации о стоимости или записаться на приём, звоните по телефону +7 (812) 309-94-92.

Современное и эффективное лечение поверхностного кариеса

На этой стадии кариеса разрушения затрагивают только верхние слои эмали зуба, поэтому лечение начального кариеса всегда самое легкое, простое и безболезненное.

В большинстве случаев для эффективного лечения первичного кариеса достаточно сошлифовать поврежденный участок эмали и нанести на него специальные реминерализующие препараты. Бормашина в процессе не используется, вместо нее применяется лазерное и озоновое оборудование.

Развивается из поверхностного кариеса и выражается в поражении дентина — внутренних тканей зуба, находящихся под эмалью. При среднем кариесе поражения зуба хорошо видны, появляется небольшая полость коричневого цвета, зуб может болеть при жевании, употреблении пищи, контакте с кислыми, сладкими, солеными, горячими или холодными продуктами питания или напитками.

Чтобы качественно вылечить средний кариес, стоматологу придется использовать бормашину. Этим инструментом он удалит разрушенный и размягченный дентин и сформирует полость под установку пломбы. Полость обрабатывается антисептиками, подсушивается и затем врач установит в нее фотополимерную пломбу.

При глубоком кариесе разрушительный процесс доходит практически до нерва зуба. В зубе образуется глубокая полость с тонким слоем дентина на дне, который закрывает пульповую камеру и сдерживает воспалительный процесс. Но если лечение не провести, дентин разрушится, бактерии проникнут в пульпу и вызовут пульпит — острое воспаление зубного нерва.

Лечение глубокого кариеса требует внимательности и профессионализма от врача, так как во время его проведения важно исключить риски повреждения пульпы и ее инфицирования кариозными бактериями и провести качественное удаление поврежденных тканей. Если эти условия не соблюдаются, кариес и пульпит возникнут уже под установленной пломбой.

Одна из наиболее опасных и неприятных форм кариеса, потому что способствует быстрому развитию пульпита и легко распространяется на соседние зубы. Свое название форма получила по месту проявления кариозных поражений — они возникают на шейке зуба.

Эмаль и дентин на этой части зуба слабые и тонкие, поэтому разрушительный процесс протекает быстро и переходит в пульпу зуба, провоцируя пульпит. Отметим, что при первых признаках пришеечного кариеса, обращение в стоматологию должно быть срочным. Даже под небольшим пятнышком в этой области может скрываться глубокая кариозная полость!

Поверхностный кариес зубов у детей

Поверхностный кариес — это кариес, при котором поражается эмаль зуба до эмалево-дентинной границы.

Причин возникновения поверхностного кариеса несколько: в первую очередь — это неудовлетворительная гигиена, также ситуацию усугубляет наличие кариесогенной микрофлоры, потребление быстроусвояемых углеводов и пониженная иммунорезистентность.

Развитие кариеса

Механизм развития кариеса таков: человек употребляет огромное количество пищи, насыщенной углеводами, попадая в полость рта, такая еда ферментируются, то есть перерабатывается микроорганизмами в органические кислоты, например, лактат. При повышении концентрации лактата pH полости рта снижается, среда становится кислой, начинается деминерализация эмали, а это значит, что кальций и фосфаты, которые входят в состав эмали, вымываются из неё. Это приводит к её постепенному локальному разрушению, и визуально определяется как белесоватое пятно.

Поверхностный кариес

При проведении осмотра полости рта стоматолог обязательно обратит на это своё внимание, а для достоверной постановки диагноза проведёт окрашивание зуба кариес-маркером, а приобретение зубом определённой окраски укажет на поражение кариесом. Следует отметить, что в некоторых случаях развитие заболевания может приостановиться само по себе. Если пациент от природы имеет высокую резистентность твёрдых тканей зубов, кариозный процесс может остановиться на стадии пятнышка.

Поверхностный кариес обязательно необходимо лечить, так как при отсутствии должного лечения процесс будет прогрессировать и тогда дефект зуба станет ещё более заметным, и зуб может приносить болезненные ощущения.

Методы лечения поверхностного кариеса

Основным методом лечения долгое время оставалась реминерализующая терапия. Она заключается в следующем: на зуб наносится аппликация препарата, который содержит важные микроэлементы: фтор, фосфор, кальций, магний, способствующие реминерализации эмали, её восстановлению.

Современным методом лечения является Icon, это микроинвазивное средство, специальный полимер проникает в область, поражённую кариесом, и заполняет возникшие поры. Под действием полимеризационной лампы полимер твердеет и тем самым улучшает состояние твёрдых тканей зуба. Повреждённая эмаль из пористой и хрупкой становится плотной, приобретает устойчивость к воздействию агрессивной среды.

Существует возможность проведения терапии в домашних условиях, обычно такой способ используется, как вспомогательный, например, для усиления эффекта от лечения в стоматологической клинике. Можно применять гели или специальные стоматологические пасты, однако применять их следует только после консультации со своим лечащим врачом.

Профилактика поверхностного кариеса

К профилактике поверхностного кариеса можно отнести:

регулярную гигиену полости рта,
снижение потребления быстроусвояемых углеводов,
плановое посещение стоматолога.

Прежде всего, пациенту необходимо научиться правильно чистить зубы, по этому вопросу его может проконсультировать стоматолог, для наглядности в этом случае применяются таблетки или растворы для индикации зубного налёта. Налёт окрашивается, по интенсивности окраски можно судить о качестве чистки зубов, о том на какие зубы или их поверхности стоит обратить внимание пациента.

Врач может рекомендовать пациенту употреблять больше продуктов, содержащих кальций, или кальцийсодержащие препараты. Для предотвращения появления кариеса у детей, иногда и у взрослых, применяется метод герметизации фиссур. Фиссуры жевательных зубов заполняются жидкотекучим материалом, таким образом, создаётся физический барьер для воздействия кариесогенных факторов. Данные рекомендации помогут оставаться с красивой улыбкой максимально долго.

Лечение кариеса зубов Днепр Стоматологическая поликлиника 1

Симптомы поверхностного кариеса

У пациента жалобы на незначительную боль, а чаще оскомины в зубе. Эти болевые ощущения происходят при воздействии химических раздражителей. При устранении причины, прекращении воздействия на зуб раздражителей боль и оскомина исчезают.
Жалобы на кратковременную боль в конкретном месте при употреблении холодных или горячих напитков или пищи. Чаще всего э
Причиной неприятной оскомины может быть механический раздражитель – например при пережевывании пищи.
На зубе появляется мелоподобное пятно
в месте, где проявился мелоподобный дефект, оказывается неглубокая полость, в пределах эмали с неровными краями.
Кариозная полость находится в пределах эмали с сохранением целости эмалево-дентинного соединения.

При осмотре доктор стоматолог отмечает шероховатость, эмаль размягченна.

Лечение поверхностного кариеса.

Первое, что сделает врач стоматолог терапевт это порекомендует вам профессиональную чистку рта.
Доктор сделает местное обезболивание в месте последующих манипуляций. Это необходимо для того, что бы лечить кариес эффективно.
Следующий шаг, это препарирование кариозной полости (стоматолог уберёт деформированную кариесом размягченную зубную эмаль)
Пломбирование кариозной полости.
Если у пациента наблюдается большое количество кариозных пятен и дефектов эмали, то возможно необходимо проведение реминерализующей терапии с использованием препаратов фтора, кальция, реминерализующих растворов, фторосодержащих лаков.
Еще один современный способ предотвращения кариеса в дальнейшем это герметизация фиссур жевательных зубов.
Назначение лечения в физиотерапевтическом кабинете такого, как электрофорез препаратами фтора, кальция, реминерализирующего препарата типа «Ремодент». Необходимо посетить 5-6 сеансов.

Результат правильного лечения и дальнейшего соблюдения всех рекомендаций стоматолога пациентом.

При эффективно проведенном лечении поверхностного кариеса зубов – пломба полностью заполняет кариозный деффект и сохраняется в течении длительного времени.

Восстановлена форма, функция и косметическое качество зуба.
Отмечается стабилизация кариозного процесса.
Отсутствуют признаки вторичного кариеса.

Безболезненное правильное лечение кариеса в г. Днепр, мы можем предложить вам в стенах нашей стоматологической поликлиники №1. В поликлинике работает команда профессиональных врачей стоматологов терапевтов, есть свой диагностический центр и физиотерапевтический кабинет.

Напоминаем, Вам, ни одна статья или сайт не смогут поставить правильный диагноз.
Необходима консультация доктора!

Записаться на приём к специалисту прямо сейчас:
(096) 032-06-70 (066) 578-78-90

Статью написала
врач — стоматолог
Бачинская Тамара
Леонидовна
Опыт работы: 30 лет
Подробнее о докторе

Лечение кариеса всех типов (поверхностный, средний, глубокий)

Факторы, способствующие возникновению кариеса

Плохая гигиена
Специфический состав слюны, препятствующий самоочищению зубов
Курение и наркотические средства использовать
Заболевания и прием антибиотиков в детском возрасте, особенно в период одонтогенеза (болезни, перенесенные матерью во время беременности, могут повлиять на молочные зубы)
Генетическая предрасположенность
Химический состав питьевой воды
Общие болезни
Чрезмерно потребление продуктов, богатых сахаром
Потребление преимущественно мягкой пищи
Прием некоторых лекарств и многое другое.

Насколько опасен кариес?

Сам по себе кариес не так опасен, как его осложнения 🙂

А именно, пульпиты, являющиеся воспалением зубного нерва. Это наиболее частое осложнение.

Другое, что может случиться, — это перелом зуба. В случае массивного кариеса стенки зуба становятся тонкими и могут сломаться даже при малейшем жевательном надавливании. «Я ел клубнику, и у меня отвалился кусок зуба».

Специалисты Центра семейной стоматологии iStomatolog, обладающие необходимыми знаниями, опытом и современными технологиями, могут:

Диагностировать кариес на ранних стадиях, а также его скрытые формы (на контактных поверхностях и поверхности, которые расположены ниже линии десны)
Предотвратить развитие кариеса под пломбой (вторичный кариес)
Предотвратить развитие осложнений
Восстановить анатомическую форму зуба
Восстановить функциональность зуба и убедиться, что он может полноценно участвовать в процессе жевания.

Этапы лечения кариеса

Осмотр, диагностика
Анестезия
Лечение тканей зуба, пораженных кариесом
Применение коффердама
Применение стоматологической прокладки из специальных материалов для предотвращения повторного -возникновение кариеса под пломбой или развитие осложнений
Применение изолирующего лайнера
Послойное введение фотополимеризованного материала
Нанесение герметика на готовую реставрацию
Коррекция окклюзии
Шлифовка и полировка резиновыми лентами и пасты разной степени абразивности

Если у пациента несколько соседних зубов, имеющих кариозный характер, их лучше лечить за один сеанс.Это сэкономит время и деньги пациента.

Поверхностные и глубокие кариозные поражения

Рис.9.1

(a) Рентгеновский снимок проксимальных полостей премоляров. (b) Старая реставрация из серебряной амальгамы и трещины. (c) Окклюзионная реставрация с инфильтрованными кариесом фиссурами

Рис.9.2

После кислотной или хелаторной деминерализации межколлагеновые пространства широко открыты. После деминерализации соляной кислоты (HCl) (a), трихлоруксусной кислоты (TCA) (b), уксусной кислоты (AA) (c, d) или этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA) (e, f) межколлагеновые пространства широко открыты

Инжир.9,3

(a – c) Коллаген расщепляется в и пептидах после действия бактериальной коллагеназы. (d, e) Эффекты хондроитиназы A – C через 5 минут (d) и 20 минут (e). Стрелки: фибриллы коллагена. Кончики стрелок и двуглавые стрелки: межколлагеновые промежутки увеличены после 20-минутного переваривания ферментом

. Рис.9.4

Очистка внешней поверхности ортофосфорной кислотой (верхние рисунки), лимонной кислотой и ЭДТА. Нижние цифры: действие бактериальной коллагеназы на кариозный дентин

Рис.9.5

Кариозное поражение, проникающее до дентинно-эмалевого перехода (DEJ). Затем следует латеральная диффузия бактерий, разрушающая дентин поверхностной мантии

Кариес может быть поверхностным, располагаться рядом с соединением дентиноэмали (периферическая выемка и твердый дентин), или в середине слоя дентина (центральный деминерализованный дентин перед окончательной выемкой), или во внутренней части, рядом с пульпой (центральный дентин. после окончательных раскопок) (Bjørndal et al. 1997 ).Следовательно, поражение может быть либо поверхностным, либо разрушать самую глубокую часть коронарного дентина. Плотность канальцев (количество канальцев / мм ²) и / или их диаметр, по-видимому, коррелируют с этим анатомическим распределением. На потолке пульповой камеры более высокая плотность канальцев. Скорость развития кариозных поражений частично связана с плотностью их канальцев; высокая плотность предполагает быстрое распространение (рис. 9.2, 9.3 и 9.4). Плотность канальцев в среднем слое коронки 18.

243 ± 3,845 в лиственном дентине человека по сравнению с постоянным дентином человека. В глубоком слое среднее значение составляло 24,162 ± 5,338. В постоянном дентине количество канальцев на мм ² составляло 21,343 ± 7,290 в глубоком слое и 18,781 ± 5,855 в среднем слое (Schilke et al. 2000 ). Отмечены вариации плотности канальцев. Получается, что в поверхностном дентине плотность канальцев составляет 17,433 ± 1,370, в наружном дентине 18,075 ± 2,415, в промежуточном слое 20.433 ± 2,568, а в глубоком дентине 26,391 ± 6,605 (Koutsi et al. 1994 ). Среднее количество канальцев в любом возрасте в венечном, шейном и гнилом дентине довольно похоже (приблизительно 44,243, 42,360 и 39,010 мм ², соответственно) (Carrigan et al. 1984 ). Однако в апикальном дентине обнаруживается значительно меньше дентинных канальцев (приблизительно 8,190 мм ²). Различия между публикациями поразительны — 40.000–51 000 канальцев на мм ². Количество дентинных канальцев на мм ² варьируется от 15 000 мкм в области дентинно-эмалевого соединения до 45 000 мкм вблизи пульпы (Garberoglio and Brännström 1976 ). Как правило, плотность канальцев увеличивается в зависимости от глубины дентина. Было замечено, что диаметр канальцев варьируется в зависимости от вида и местоположения в пространстве и времени. У молодых людей дно пульпарной камеры представляет собой каналец большого диаметра, при этом размер отверстий дентинных канальцев уменьшается с возрастом (Kontakiotis et al. 2015 ). В молочном дентине диаметр канальцев варьировал между глубоким слоем (2,82 ± 0,28) и средним слоем (2,55 ± 0,16). В постоянном дентине диаметр варьировался между глубоким слоем (2,90 ± 0,22) и средним слоем (2,65 ± 0,19) (Schilke et al. 2000 ). Диаметр канальцев варьируется между поверхностным 0,96, внешним 1,08, промежуточным 1,10 и глубоким слоями 1,29 (Koutsi et al. 1994 ).

Диаметр канальцев увеличивается вместе с глубиной дентина.Кариозные поражения человека предполагают деградацию коллагена. Это находится под контролем представителей семейства металлопротеиназ (ММП-1, ММП-2, ММП-8, ММП-13 и ММП-14), эластазы нейтрофилов человека и цистеиновых протеиназ. MMP-2 и MMP-9, также называемые желатиназами A и B, разрезают волокна коллагена на две части (1/4 и 3/4). MMP-2 и MMP-9 могут удалять телопептиды с концов спирального коллагена, но только MMP-8 является настоящей коллагеназой, которая может расщеплять коллаген на 2 больших фрагмента. Катепсин К расщепляет как спиральные, так и телопептидные области.Выражение в здоровом, пораженном и пораженном кариесом дентине. Цистеиновые катепсины разрушают коллаген I типа, ламинин, фибронектин и протеогликаны. Катепсины B и L расщепляют неспиральные телопептидные удлинения коллагенов, тогда как катепсин K расщепляет коллаген в тройной спиральной области. Кариес стимулирует экспрессию MMP-2 в здоровом, пораженном кариесом и инфицированном кариесом дентине. Цистеиновые катепсины разрушают коллаген I типа, ламинин, фибронектин и протеогликаны. Катепсины B и L расщепляют неспиральные телопептиды коллагенов, тогда как катепсин K расщепляет коллаген в тройной спиральной области (Nascimento et al. 2011 ). Поражения дентина можно разделить на поверхностные поражения (глубина до 2-3 мм), глубокие поражения (глубина до 3-5 мм) и глубокие поражения (с обнажением пульпы) (рис. 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 и 9.10). Только золотые участники могут продолжить чтение. Войдите или зарегистрируйтесь, чтобы продолжить

Связанные

Лазерно-индуцированная флуоресценция в диагностике кариеса зубов

Абстрактные

В этом исследовании были исследованы спектры автофлуоресценции твердых тканей зубов как в нормальных, так и в патологических областях. Измерения проводились как на неповрежденных твердых тканях исследуемых зубов, таких как эмаль, дентин, цемент и корневой канал, так и на тканях, патологически пораженных кариесом (поверхностном, промежуточном и глубоком). Для облучения поверхностей зубов использовались различные длины волн лазера (337 нм, 488 нм и 514 нм), а спектрограф с компьютерным управлением регистрировал флуоресцентные спектры. Эмиссионные сигналы были сохранены, измерены, проанализированы и количественно определены с точки зрения распределения длин волн и относительной интенсивности фотонов.Результаты показали, что флуоресцентные спектры здоровой эмали, дентина и цемента были почти идентичны по форме в зависимости от длины волны возбуждения. Интактные и пораженные твердые ткани сильно различались по интегральной интенсивности флуоресценции. Было обнаружено, что здоровые области производили наиболее выраженную интенсивность флуоресценции, тогда как кариозные области производили более слабую интенсивность флуоресценции. Было обнаружено, что независимо от длины волны лазерного возбуждения области дентина производят наиболее выраженную интенсивность флуоресценции, чем любой другой стоматологический компонент.Сигнал флуоресценции пораженной кариозной структурой зуба показал спектральную кривую с тростниковым смещением, более выраженную после возбуждения 488 нм. После возбуждения ультрафиолетовым лазером при глубоком кариесе (коронокорневой кариес) наблюдается выраженное красное смещение. Возбуждение видимыми длинами волн не вызывало таких различий между интактной и глубокой кариозной тканью шейки матки. Использование монохроматического источника света без какого-либо светового потока на длинах волн флуоресценции, например При использовании лазера с соответствующими фильтрами разницу в флуоресценции между неповрежденной и кариозной эмалью, как правило, было легко заметить.Наконец, мы обнаружили, что синяя линия аргонового ионного лазера предпочтительнее для обнаружения поверхностного кариеса, в то время как азотный лазер, излучающий ультрафиолетовое излучение, способствует лучшему распознаванию при диагностике глубокого кариеса.

Кариес поверхностный — английский перевод — Linguee

Superficiales кариеса y ca vidades.

bwimedical.com

Поверхностный кариес an d c avi стяжки .

bwimedical.com

Esta forma de tratamiento es perfect para nios temerosos y poco cooperativos que presenten

[…] las lesione s d e кариес поверхностный d e sc ritas.

wh.com

Эта форма лечения идеально подходит для детей, склонных к сотрудничеству и тревожных

[…] с окошками cr ibed sur fac e caries l esions .

wh.com

Утилизатор озонового газа

[…] en lesione s d e кариес поверхностный ( c на o sin sellado) […]

mejora los resultados clnicos de forma demostrable.

Вт.com

Заявка

[…] озон ga s до sur fa ce caries le si ons (w с или без […]

) заметно улучшает клинические данные.

wh.com

El uso exclusivo del ozono sin preparacin slotendr xito si el

[…]

gas alcanza las bacterias, esto es,

[…] en el cas o d e Superficiales e n s uperficies […]

lisas y en fisuras poco profundas y accesibles.

wh.com

Исключительное применение озона без подготовки только успешно

..]

, если газ достигает бактерий, т.е. в

[…] case o f sup erf ici al caries on sm oot h sur fa ces и […]

трещин плоских, доступных.

wh.com

Hongos Deuteromicetos de

[…] caries blanda: hongos que provocan un tip o d e caries c a ra cterizada por el ablandami en superficial superficial superficial d e l a madera, por lo que pueden prov oc a r кариес p isve.com

Дейтеромицет es мягкий полость грибки : грибки, вызывающие yp e из полость char ac terized путем размягчения поверхности древесины, хотя ls o ca использовать de ep полости .

isve.com

Y a quin preocupa

[…] que produ zc a n caries e n l os nios?

europarl.europa.eu

А кого это волнует

[…] если дадут ч ildr эн т oo -й распад ?

europarl.europa.eu

Esto reduce el riesg o d e кариес y de инфекций.

Healthychildcarenc.org

Это уменьшает r isk f или тоже -й распад и d i nfe ction s .

Healthychildcarenc.org

Ofrezca a sus pacientes la forma ms moderna

[…] de tratamiento d e l a кариес y co nserve la sustancia [.

..]

dental sana el mayor tiempo posible.

kavocanada.com

Предлагаем пациентам

[…] самый up t o date for m o f caries t rea tme nt an d сохранить […]

здоровых веществ зуба на максимально долгий срок.

kavocanada.com

Adems, la Resequedad de la boca puede causar

[…] Инфекция ан ла бока и л а кариес .

healthlibrary.b … amandwomens.org

Кроме того, сухость во рту может вызвать сухость во рту

[…] Инфекция на s и на на распад .

healthlibrary.b … amandwomens.org

Si u n a кариес s e d etecta en un estado […]

temprano, se Requiere un tratamiento que cuida la sustancia dental.

kavoesp.com

W hen caries is dia gno sed at таких […]

— ранняя стадия, тогда требуется лечение, которое защищает ткань зуба.

kavoesp.com

El limpiarse los dientes regularmente

[…] remueve la placa dental y ayuda a превентор l a s кариес .

nyhealth.gov

Чистить зубы

[…] регулярно h elps pre ven t полостей b y g ett ing r id зубного налета.

nyhealth.gov

Esto queda resumido en la

[…] especie de remi en d o поверхностный q u e caracteriza […]

al Convenio nuevamente negociado.

europarl.europa.eu

Это суммируется видом

..] мастеринг o на краях который c характеризует […]

пересмотренная Конвенция.

europarl.europa.eu

Esto provoca проблема s d e кариес e в fecciones del odo.

brunswickcommunityhospital.org

Вызывает

[…] Проблема ms wit h to ot h decay a nd ear inf ec tions.

brunswickcommunityhospital.org

Alrededor de un 45% de las excitaciones anuales se pierden

[…] en escorre nt a поверхностный , u n 30% se empora […]
y un 25% se infiltra en el suelo.
riob.org

Около 45 процентов годового количества осадков стекает в виде

[…] surfac e runof f, около 30 perc en t испаряется, […]

и 25 процентов проникает в землю.

riob.org

El s ue l o поверхностный t i en e una textura de limo fluvial, de profundidad […]

переменная.

eur-lex.europa.eu

Верхний слой почвы имеет текстуру речной грязи и имеет разную глубину.

eur-lex.europa.eu

La saliva ayuda a mantener los dientes limpios, por lo tanto es

[…] мс вероятный t en e r кариес s i t iene la boca seca.

nyhealth.gov

Слюна помогает сохранить зубы чистыми, значит, вы больше

[…] вероятно г и т.д.
nyhealth.gov

Estos alimentos generan ms placa que

[…

] otros y pueden prov oc a r кариес .

philips.es

Эти продукты образуют больше налета, чем

[…] другие nd банка ле d t полость .

philips.co.uk

Un diente saludable tiene un ndice de transmisin de luz

[…] мэр аль де уно c o n кариес o c lculo.

sdi.com.au

Здоровый зуб имеет индекс светопропускания

[…] больший и распад или ca lculu s .
sdi.com.au

El accesorio de diagnstico es una herramienta perfect para

[…] ayudarle en el manej o d e caries t e mp rana.

sdi.com.au

Диагностическая насадка — отличный инструмент к

[…] помощь y ou wi th ear ly caries ma nag eme nt .

sdi.com.au

La conservacin de la sustancia dental sana es el mximo objetivo de

[…] la terapi a d e кариес m ni mo-invasiva.
kavofr.com

Сохранение здорового зубного вещества — первоочередная цель

[…] мини ma lly inva si ve caries th er apy .

kavofr.com

La placa se pega a sus dientes y le da a los cidos una oportunidad de comerse el esmalte del diente,

[…] возможные причины и d o кариес d e nt al.

скасау-джерси.com

Зубной налет прилипает к зубам и дает кислотам возможность разъедать защитную эмаль зуба,

..] в итоге c ausi ng t oo -й распад .

scasouthjersey.com

Este dao al

[…] Возможна форма n d e кариес .

э. 4 детей.org

Эта поломка

[…] e namel al низкий s полости t o f orm .

4children.org

Pero este germen en special es la oveja negra de la familia porque

[…] se relaciona con l a s кариес .

womenshealth.gov

Но этот конкретный микроб — паршивая овца в семье, потому что

[…] это li nked to тоже -й распад .

womenshealth.gov

La poblacin ha promulgado nuevas reglas para proteger

[…] y сравнительный эль ag u a поверхностный y su bterrnea que se […]

obtiene gracias a los proyectos.

unpeilac.org

Народ принял новый

[…] правила защиты и распределения т он поверхность г подземные воды […]

, зафиксированный в проектах.

unpeilac.org

Qu trabaja en los lugares uno no

[…] puede trabajar en o tr o , поверхностный l u ga r аналогичный.

antenna.wimo.de

Что работает на одном месте май

[…] не работает k на oth er, внешне sim или ar pl ac e.

antenna.wimo.de

Предполагается, что в конце концов

[…] dolores causados p o r кариес d e nt ales se sienta distrado [.

..]

y desanimado.

Healthychildcarenc.org

Ребенок испытывает pai n из den tal полостей is lik ely t o отвлекаться […]

и деморализованы.

Healthychildcarenc.org

Este mtodo sin dolores

[…] para el tratamient o d e caries h a r esultado atractivo […]

para nuevos pacientes.

kavoesp.com

Это безболезненное

[…] метод tr eatin g t oot h распад h as pro ven t o be очень […]

привлекателен для новых пациентов.

kavoesp.com

Таблица 1 | Феномен кариеса: хронология от колдовства и суеверий до мнений 1500-х годов и современной науки

000–25 000 до н.э.


Дата	Клинический / ученый	Наблюдения

	Распад и потеря альвеолярной кости очевидны в челюстях черепов неандертальцев эпохи палеолита [20].
22 000 до н.э.		Распад зубов и потеря костной ткани на челюстях кроманьонца в период палеолита показали, что большинство повреждений располагалось на стыке цемента и эмали или вдоль него [20].
2100 г. до н.э.		Глиняные таблички из Ассирии просили богиню Эа поместить зубного червя между зубами и челюстной костью, чтобы разрушить кровь и прочность зубов [21, 23].
1,500 г. до н.э.		На костях оракула времен китайской династии Шан были обнаружены символы, в которых упоминался зубной червь, вторгшийся в рот и зубы [21].
460–377 до н.э.	Гиппократ	Греческий отец медицины, чье учение о болезни основывалось на гуморальной патологии: застой испорченных соков в зубах причинял боль. Он дискредитировал болезнь, вызванную магией или мифологией [21, 24].
384-322 до н.э.	Аристотель	Греческий философ, наблюдавший, что сладкие продукты, такие как мягкий инжир и финики, вызывают липкую пленку на зубе, что приводит к гниению и разрушению зубов [26].
200 г. до н.э.	Agatharchidas	Люди Красного моря пострадали и умерли от мелких червей, которые разъедали многие ткани тела [30].
62	Плиний Старший	Написал, что его друг Фереркид с Сироса умер от лианы, выползшей из его рта и тела [30].
129–200 / 217 нашей эры	Гален из Пергама	Греческий врач, считавший, что плохое питание вызывает слабые, тонкие и ломкие зубы; скопление внутренней корродирующей жидкости вызвало кариес [14, 27].
1300–1368 н.э.	Ги де Шолиак	Считал, что зубной червь существует и является причиной разрушения зубов. Он предложил окуривание луком-пореем и беленой, чтобы избавиться от зубной боли [29].
1525 AD	Амбруаз Паре	Внутренние жизненные силы изнутри тела и зубов вызвали кариес. Он дискредитировал идею зубного червя [34].
1684 AD	Antonie van Leeuwenhoek	Наблюдал за множеством мелких прядильных микроорганизмов из ротовой слюны, которые он назвал анималкулами [47].
1700 AD	Bondette и Jourdain	Они назвали кариес гангреной зубов, вызванной воспалением тканей и отмиранием кости вокруг шейки зуба [20].
1700 г. н.э.	Антони ван Левенгук	Написал Королевскому Лондонскому обществу, что он извлек живых зубных червей из поврежденных зубов своей жены, отметив, что они были такими же, как живые сырные черви, найденные в сыроварне [ 32].
1728 AD	Пьер Фошар	Считается отцом современной стоматологии, дискредитировал теорию зубных червей и считал, что кариес зубов вызван опухолью из костных волокон [20, 35].
1780 г. н.э.	Джон Хантер	Предпочитал термин «умерщвление» кариесу и полагал, что причиной разрушения является дисбаланс внутренних сил, который вызывает воспаление и заболевание пульпы [36].
1798 г. н.э.	Т. Чарльз Хоуп	Он полагал, что кариес вызван внешними силами, и отверг теорию внутреннего воспаления зуба [42].
1806 AD	Джозеф Фокс	Предпочитал термин «кариес».Он полагал, что воспаление зуба было вызвано внутренним повреждением выстилающей мембраны вдоль стенки пульпы и дентина [37].
1831 AD	Thomas Bell	Считал, что кариес имеет наследственный компонент [38].
1835 AD	William Robertson	Кариес возник в результате химического распада на внешней стороне зуба. Он осудил внутренние факторы [41].
1838 г. н.э.	M. Rognard	Считал, что кариес начинается в ямках и трещинах коронки на внешней стороне зуба [44].
1841 AD	M. A. Dèsirabode	Обозначены семь стадий разрушения зубов [45].
1841 AD	Levi Spear Parmly	Первый защитник гигиены полости рта для пациента [52].
1842 AD	Леонард Кёкер	Считал, что кариес зубов вызван внутренним воспалением в результате быстрых изменений температуры [39].
1843 г. н.э.	А. Уэскотт и Дж. У.Dalyrymple	Английские врачи, считавшие, что кариес вызван внешними силами ротовой полости [43].
1847 AD	Justis von Liebig	Брожение описывается как химический процесс [46].
1848 AD	John Tomes	Считал, что зарождающийся кариес вызывает разрушение минералов, что приводит к гиперчувствительности зубов [48].
1855 г. н.э.	Чапин А. Харрис	Ранний американский педагог, считавший, что кариес вызван внешними факторами ротовой полости [40].
1861 AD	Луи Пастер	Доказано, что ферментация — это «жизненно важный процесс», требующий наличия микроорганизмов [47].
1878 AD	T. Leber и J. W. Rottenstein	Считали, что кариес возник в результате бактериальной ферментации остатков пищи и жидкостей полости рта, которые привели к присутствию бактерий в дентинных канальцах [50].
1879 г. н.э.	Франк Эбботт	Считал, что кариес возник в результате химического процесса, в результате которого растворяются минералы зуба с последующим образованием и организацией протоплазматической гелеобразной массы [2–4].
1881 AD	Г. А. Миллес и А. С. Андервуд	Кариес, скорее всего, был вызван деминерализацией органическими кислотами, продуцируемыми бактериями [51].
1884 AD	Грин Вардиман Блэк	Первый, кто собрал загадку о кариесе, которая включала остатки пищи, студенистый мусор и кислоты, которые вызывали деминерализацию, приводящую к начальному поражению кариесом [5].
1890 AD	Уиллоуби Д. Миллер	Кариес возник в результате разъедающего действия молочной кислоты бактерий, вызывающих повреждения эмали [10].
1897 г. н.э.	Джон Леон Уильямс	Разрушенные человеческие зубы показали плотную войлокообразную массу кислотообразующих микроорганизмов, зубного налета, которые оказали свое химическое влияние на кальцинированные ткани [6–8].
1923 AD	W. Clyde Davis	Выявлена мягкая поверхностная кариозная зона с большим количеством бактерий и более глубокая зона кариеса с меньшим количеством бактерий и некоторой деминерализацией [53].
1940 г. н.э.	R.M. Stephan	In situ изменения pH биопленки зубного налета в присутствии сахара [54].
1954 AD	B. E. Gustafsson	Частота потребления сахара детьми в специализированных учреждениях (Vipeholm) связана с переживанием кариеса [55].
1955 AD	Frank J. Orland	Доказано, что кариес не развивался у стерильных крыс [15].
1960 г. н.э.	Рон Фитцджеральд и Пол Киз	Они продемонстрировали этиологическую роль специфических стрептококков в процессе кариеса, делая его инфекционным и трансмиссивным заболеванием [15].
1965 AD	Sam Kakehashi	Доказанные бактерии необходимы для воспаления или некроза пульпы при использовании стерильных животных [56].
1972 AD	Takao Fusayama and S. Terachima	Показали клиническое различение двух слоев кариозного дентина с биологическим окрашиванием, которое обеспечило четкую визуальную дифференциацию инфицированного и пораженного слоев [57].
1975 г. н.э.	А. Шейнин и К.K. Makinen	Исследование Турку показало, что замена сахара ксилитом снижает вероятность возникновения кариеса [58].
1978 г. н.э.	Maury Massler	Показал клиническую важность для стоматолога дифференциации инфицированного активного кариозного дентина от более глубокого кариозного дентина [59].
1980 AD	Theodore Koulourides	Консолидация поражений с реминерализацией и повторным упрочнением эмали в кальцифицирующих растворах, содержащих фторид [60].
1981 AD	Martin Brännström	Бактериальные микротекания в дентин и пульпу вызывают рецидивирующий кариес, воспаление пульпы и некроз [61].
1986 AD	Walter J. Loesche	Разработал «гипотезу специфического налета», согласно которой кариес был ацидогенной бактериальной инфекцией, вызываемой стрептококками mutans и видами лактобацилл [62].
1994 AD	Филип Д. Марш	Разработал «экологическую гипотезу зубного налета» для описания динамических отношений в консорциумах биопленок зубного налета, где низкий pH способствует росту кариесогенных микроорганизмов [63].
1998 г. н.э.	Eva. J. Mertz-Fairhurst et al.	Десятилетнее исследование клинических исходов кариозных поражений с запечатанным дентином показало остановку прогрессирования поражений с отсутствием клинических повреждений пульпы по сравнению с контрольной группой с традиционным удалением кариеса [64].
2004 AD	Эдвина А. М. Кидд	Метаболическая активность в биопленке зубного налета человека является важнейшей движущей силой любой потери минералов с поверхности зуба или полости и, как следствие, воспаления пульпы [65].
2009 AD	Eric C. Reynolds	пришел к выводу, что технологии реминерализации на основе фосфата кальция показали многообещающие дополнительные методы лечения фторидной терапии при раннем лечении кариеса [66].

Avens Publishing Group — Зубной камень Арест кариеса

Research article

Пол Х. Киз ¹ и Томас Э. Рамс ^{2 *}

¹ Ранее Национальный институт стоматологических и черепно-лицевых исследований, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд, США; в настоящее время на пенсии, Вашингтон, округ Колумбия, США
² Отделение пародонтологии и оральной имплантологии и Лаборатория обслуживания микробиологии полости рта, Школа стоматологии, Отделение микробиологии и иммунологии, Медицинская школа, Университет Темпл, Филадельфия, Пенсильвания, США

^* Адрес для корреспонденции: Thomas E.Rams, DDS, MHS, PhD, Отделение пародонтологии и оральной имплантологии, Лаборатория службы тестирования микробиологии полости рта, Школа стоматологии, Отделение микробиологии и иммунологии, Школа медицины, Университет Темпл, Филадельфия, Пенсильвания, США, тел .

: (215) 707-2941; Факс: (215) 707-4223; Эл. Почта: [email protected]

Образец цитирования: Keyes PH, Rams TE. Остановка зубного камня при кариесе. J Oral Bio. 2016; 3 (1): 4.

Авторские права © 2016 Keyes PH и Rams TE.Это статья в открытом доступе, распространяемая по лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Журнал оральной биологии | ISSN: 2377-987X | Том: 3, Выпуск: 1

Поступило: 18 сентября 2015 г. | Принята в печать: 8 февраля 2016 г. | Опубликовано: 12 февраля 2016 г.

Abstract

Предпосылки: В некоторых исследованиях была отмечена обратная зависимость между минерализацией зубного камня и деминерализацией кариеса на зубах.Зубной камень может даже образовывать поверхностные слои над существующим кариесом и останавливать его прогрессирование, но это явление редко документируется и нечасто рассматривается в области кариологии. Чтобы дополнительно оценить возникновение зубного камня при кариесе, в этом исследовании оценивали большое количество удаленных человеческих зубов на наличие и расположение зубного кариеса, зубного камня и биопленок зубного налета.

Материалы и методы: В общей сложности 1200 зубов были сохранены в 10% забуференном формальном физиологическом растворе и просмотрены во влажном состоянии одним опытным исследователем с использованием стереомикроскопа для исследований при увеличении 15-25x.Репрезентативные зубы были разрезаны и сфотографированы, а их биопленки зубного налета подверглись исследованию с помощью окрашивания по Граму с помощью световой микроскопии при 100-кратном увеличении.

Результаты: Зубной камень наблюдался на 1140 (95%) удаленных человеческих зубах, и не было обнаружено кариозных поражений под поверхностями, покрытыми зубным камнем, на 1139 из этих зубов. Однако остановка зубного камня при кариесе была обнаружена на одном (0,54%) из 187 обследованных зубов, которые имели нереставрированный проксимальный кариес эмали.На дистальной поверхности премоляра верхней челюсти минерализация зубного камня заполнила кавитацию на внешней поверхности зарождающегося кариеса. Покрытое зубным камнем кариозное поражение лишь незначительно распространялось на эмаль и демонстрировало коричневую пигментацию, характерную для неактивного или остановленного кариеса зубов. Напротив, мезиальная поверхность зуба без поверхностного слоя зубного камня имела большое кариозное поражение, проходящее через эмаль и глубоко в дентин.

Выводы: Эти наблюдения дополнительно подтверждают потенциальные защитные эффекты минерализации зубного камня от кариеса.

Ключевые слова

Зубной камень; Кариес; Зубной налет; Человек; In vitro ; Зубы

Введение

Отложение зубного камня на наддесневых и поддесневых поверхностях зубов традиционно считается вредным для здоровья полости рта человека [1]. Наддесневой камень может способствовать развитию рецессии десны [2], а у зубов с положительным результатом на поддесневой зубной камень наблюдается большая частота клинической потери прикрепления пародонта у подростков [3] и пациентов с нелеченым хроническим или агрессивным пародонтитом [4,5].Однако пародонтопатический потенциал зубного камня в значительной степени проистекает из неминерализованных бактериальных биопленок, связанных с заболеванием, покрывающих его внешние поверхности и гнездящихся в его структурных лакунах и пористостях [6,7], поскольку сам зубной камень проявляет незначительную патогенность при стерилизации без живых микроорганизмов [8 ], и может даже обеспечить прилегающую поверхность для соединительного эпителия при дезинфекции [9]. Более того, примечательно, что кариес и зубной камень используют противоположные биохимические процессы в развитии полости рта.Кариес зубов, многофакторное инфекционное заболевание, запускает деминерализацию восприимчивых зубов в результате в значительной степени обусловленной сахарозой ацидогенной активности стрептококков mutans и других видов кариесогенных бактерий в биопленках зубного налета [10–12].

Напротив, образование кристаллов зубного камня зависит от прогрессирующей минерализации, которая происходит с осаждением минеральных солей фосфата кальция на поверхности зубов из секретов слюнной и десневой щелочной жидкости [13], даже в отсутствие микроорганизмов зубного налета [14].В результате неудивительно, что наблюдалась обратная клиническая зависимость между зубным камнем и кариесом. Леонард заметил в 1926 году, что «редко можно найти кариес во рту у тех, кто много ест, там, где присутствует много зубного камня, и уж тем более никогда в тех же областях» [15]. В шести клинических испытаниях средств для ухода за зубами, проведенных в период с 1970 по 1986 год с участием 6 284 детей в возрасте 11-13 лет, исходная распространенность кариеса и его последующая заболеваемость в течение трехлетнего периода в среднем были на 16-20% ниже. дети с наддесневыми отложениями зубного камня, независимо от воздействия фтора [16].В другом клиническом испытании средств для ухода за зубами с участием 437 взрослых в возрасте 20-65 лет, отобранных по их склонности к образованию зубного камня, статистически значимые отрицательные коэффициенты корреляции были обнаружены на индивидуальной основе между средними оценками прироста зубного камня за три месяца и средними показателями распространенности кариеса [ 17]. Эти данные свидетельствуют о том, что у людей с высоким уровнем образования зубного камня возникает меньше кариеса, тогда как больший риск кариеса связан с отсутствием или незначительной минерализацией зубного камня.В других исследованиях не удалось найти существенной взаимосвязи между зубным камнем и кариесом [16,17], но на их выводы, возможно, повлияли малые размеры выборки и неадекватный учет потенциальных мешающих факторов, таких как плохая гигиена полости рта и пожилые участники исследования [16 , 17]. Зубной камень может даже образовывать поверхностные слои над существующими кариесными поражениями и останавливать их прогрессирование, но этот феномен редко документируется и редко рассматривается в области кариологии [18].

В ранних наблюдениях сообщалось о клинической остановке нелеченного кариеса зубов из-за отложений зубного камня, развивающегося у детей с диабетом, когда они были приведены к гликемическому контролю с помощью низкоуглеводной диеты, богатой минеральными солями [19]. В исследованиях на хомяках на животных было замечено, что зубной камень формируется на внешней поверхности поражений корневого кариеса и останавливает их прогрессирование, когда диеты с высоким содержанием сахарозы, благоприятствующие деминерализации и кариесу зубов, были заменены на белковый лабораторный корм, способствующий минерализации и развитию зубного камня [20, 21].Доступно немного данных о частоте, с которой зубной камень может быть задействован в остановке существующего кариеса. В исследовании 2300 удаленных задних зубов человека, в общей сложности 14 зубов, с распространенностью 0,56%, демонстрировали поверхностный слой зубного камня, осажденный на внешней поверхности проксимального кариеса зубов с коричневой пигментацией, связанной с задержанными поражениями [22]. . Чтобы еще больше задокументировать возникновение зубного камня при кариесе, в этом исследовании оценили 1200 удаленных человеческих зубов на наличие и расположение зубного кариеса, зубного камня и биопленок зубного налета.

Материалы и методы

Всего за несколько лет в середине 1960-х годов от Министерства здравоохранения США было получено 1200 удаленных недолезных зубов человека (277 резцов, 138 клыков, 415 премоляров и 370 коренных зубов). Обслуживать стоматологическую клинику при Национальном институте здравоохранения, Бетесда, Мэриленд, США, без какой-либо сопроводительной демографической информации пациента, стоматологического диагноза, данных стоматологического или медицинского анамнеза или причин для удаления Зубы были сохранены в 10% забуференном формальном физиологическом растворе и осмотрены во влажном состоянии одним опытным исследователем (автор П.Х. Киз) с помощью исследовательского стереомикроскопа с увеличением 15-25x для выявления наличия и локализации кариеса, зубного камня и биопленок зубного налета.

Репрезентативные зубы были разрезаны и сфотографированы, а их биопленки зубного налета подверглись исследованию с помощью окрашивания по Граму с помощью световой микроскопии при 100-кратном увеличении.

Одобрение на это исследование было предоставлено Национальными институтами здравоохранения, а для настоящего анализа данных — Институциональным наблюдательным советом по защите прав человека при Университете Темпл.

Результаты

Минерализованные отложения зубного камня, от легкого до тяжелого, наблюдались на 1140 (95%) исследуемых зубах. На 1139 удаленных человеческих зубах под поверхностями, покрытыми зубным камнем, не было обнаружено кариозных поражений.

Однако один верхний премоляр имел на своей дистальной поверхности поверхностный слой зубного камня, покрывающий и заполняющий кавитацию на внешней поверхности зарождающегося проксимального кариеса зубов (рис. 1). Было обнаружено, что в поперечном сечении кариесное поражение лишь незначительно проникает в эмаль с минимальными изменениями нижележащего дентина и демонстрирует коричневую пигментацию, характерную для неактивного или остановленного кариеса зубов (Рисунки 2 и 3).Напротив, мезиальная поверхность зуба без поверхностного слоя зубного камня на его внешней поверхности имела большое кариозное поражение, проходящее через эмаль и глубоко в дентин (Рисунок 2), с темной пигментацией деминерализованного дентина и лежащих под ним дентинных канальцев. Одиночный зуб, показывающий слой зубного камня над остановленным проксимальным кариозным поражением, составлял 0,54% из 187 обследованных зубов, которые имели нереставрированный проксимальный кариес эмали. Информация о пациенте, у которого был удален этот зуб, отсутствовала.

Рис. 1: Зубной камень, покрывающий кариес. Отложение зубного камня на дистальной поверхности премоляра верхней челюсти, которая простирается от цементно-эмалевого соединения до внешней поверхности зарождающегося кариеса зубной эмали вблизи контактной зоны. * P <0,05.

Рис. 2: Прогрессирование кариеса с наложением зубного камня и без него. На поперечном срезе премоляра верхней челюсти виден зарождающийся кариес зубной эмали, покрытый поверхностным слоем зубного камня на дистальной поверхности (слева) (белая линия на стыке эмали и дентина является обрабатываемым артефактом), а также большое кариозное поражение зубов на мезиальной поверхности, распространяющееся глубоко вглубь. дентин без зубного камня (справа).* Р <0,05.

Рис. 3: Отложение зубного камня в кариозном поражении зубов. Увеличенный вид дистальной поверхности зуба с «пломбой» зубного камня в зарождающемся кариозном поражении эмали (белая линия на стыке эмали и дентина — артефакт обработки). * P <0,05.

В дополнение к этим результатам, 360 (30%) из 1200 исследованных удаленных зубов имели кариес проксимальной поверхности эмали, из которых 173 (48,1%) были подвергнуты стоматологической реставрации. Кариес корня отмечен на 432 (36%) зубах.В общей сложности у 804 (67%) удаленных зубов поверхность лицевых зубов была чистой, хорошо отполированной и лишенной биопленок зубного налета, что свидетельствует о хорошем домашнем контроле зубного налета пациента на этих участках зубов. На менее доступных проксимальных участках и поверхностях корней на 1056 (88%) зубах был обнаружен прилипший клейкий рост, характерный для биопленок зубного налета, и неправильный контроль домашнего налета пациента (Рисунок 4). Микроскопическое исследование мазков, окрашенных по Граму, части этих липких образований выявило почти исключительно бактериальные клетки.

Рисунок 4: Микробная биопленка зубного налета. Пример толстой и прочной биопленки зубного налета, установленной на проксимальной поверхности премоляра. * P <0,05.

Обсуждение

Эти наблюдения предполагают защитный эффект отложения зубного камня против кариеса. На 1139 удаленных человеческих зубах под поверхностями, покрытыми зубным камнем, не было обнаружено кариозных поражений зубов, а также была обнаружена «пломба» зубного камня на внешней поверхности зарождающегося проксимального кариеса на верхнечелюстном премоляре человека.Это последнее наблюдение зубного камня, преципитирующего над существующим кариесом, имело место на 0,54% из 187 зубов с невосстановленным проксимальным кариесом эмали, что почти идентично распространенности этого явления в 0,56%, о которой сообщалось в предыдущем исследовании удаленных зубов человека [22]. Временная последовательность появления зубного камня и кариеса на этом конкретном зубе с «пломбировкой» зубного камня не известна. Однако маловероятно, что зубной камень и кариес развиваются одновременно на одном и том же проксимальном участке поверхности зуба.Tanzer et al. успешно индуцировал зубной камень и кариес у крыс одновременно, но только в разных частях зубного ряда, а не на одной и той же поверхности зубов [23]. Точно так же на дентиновых пластинах, которые носили люди-добровольцы в съемных приспособлениях, экспериментальная деминерализация дентина была отмечена только в областях, окружающих отложения зубного камня, но не под ними [24]. В этом отношении Driessens et al. указал, что, поскольку растворимость зубного камня намного выше, чем растворимость эмали, деминерализация эмали не может происходить под минерализованными отложениями зубного камня на поверхности зубов [22].Другими словами, из-за его большей растворимости в кислой среде зубной камень на поверхности зуба будет иметь больший потенциал деминерализации до деминерализации любой подлежащей эмали. Более высокая чувствительность зубного камня к кислотной деминерализации по сравнению с эмалью препятствует образованию кариеса под образовавшимися отложениями зубного камня [22]. Основываясь на этом, в настоящем исследовании для верхнечелюстного премоляра (рис. 1-3) постулируется, что наблюдаемый проксимальный кариес зубов развился до отложения зубного камня на дистальной поверхности зуба.В результате постулируется, что зубной камень откладывается над кариесом на дистальной поверхности зуба, образующимся вторично после неизвестного изменения, произошедшего в полости рта пациента, которое затем способствовало минерализации в этот момент, а не продолжающейся деминерализации. Факторы, вызывающие изменение минерализации ротовой полости пациента по сравнению с потенциалом деминерализации, не могли быть определены в настоящем исследовании, однако этот предложенный сценарий согласуется с наблюдениями в исследованиях на моделях хомяков, где диета изменяется с одного продукта с высоким содержанием сахарозы на диету с высоким содержанием сахарозы. протеин, изменил условия минерализации полости рта и способствовал осаждению зубного камня на существующих кариозных поражениях зубов [20,21].Аналогичным образом было показано, что богатая сахарозой и бедная фосфатом диета у крыс вызывает высокую активность кариеса зубов и небольшое образование зубного камня, тогда как диета, бедная сахарозой и богатая фосфатом, увеличивает образование зубного камня и уменьшает кариес зубов [25]. При переходе на низкоуглеводную диету с высоким содержанием белка также наблюдается заметное увеличение отложения зубного камня [26]. Это может быть связано с комбинированными эффектами пониженного потребления ферментируемых углеводов, снижающих ацидогенную активность оральных кариесогенных микроорганизмов [27], и высокого потребления белка, увеличивающего секрецию слюнной мочевины, которая после метаболизма в аммиак и CO ₂ пероральным уреолитическим средством бактерии, способствуют повышению pH зубного налета до более щелочного уровня и способствуют его кальцификации в зубной камень [28].Также в соответствии с концепцией несовместимости зубного камня и кариеса, основные виды кариесогенных бактерий, Streptococcus mutans, не изолированы от культивируемой микробиоты, связанной со зрелыми наддесневыми или поддесневыми зубными камнями [29]. Mühlemann [30] о зубном камне, который прокомментировал, что «трудно рассматривать процессы кальцификации как первично патогенные», и что «превращение метаболически активных микробных колоний в неживые кальцифицированные массы можно интерпретировать как защитный механизм».Может случиться так, что минерализация зубного камня как защитная реакция хозяина не осаждается достаточно быстро на поверхности зубов, чтобы адекватно фоссилизировать патогенные биопленки зубного налета и предотвращать их способность вызывать кариес и заболевания пародонта. Терапевтические усилия могут быть лучше направлены на борьбу с патогенными бактериальными биопленками, которые могут колонизировать зубной камень, по сравнению с основным направлением на прекращение минерализации зубного камня на поверхности зубов. Как указали Киз и Шерн [31], проще и с точки зрения прогноза лучше периодически удалять кальцификаты зубного камня с данной поверхности зуба, чем лечить на нем кариес корней.Необходимы дальнейшие исследования, чтобы лучше определить защитный и патогенный потенциалы зубного камня в полости рта.

Заключение

В заключение, это исследование удаленных человеческих зубов показало, что зубной камень откладывается на внешней поверхности начинающегося проксимального кариеса на дистальной поверхности одного премоляра верхней челюсти и останавливает его прогрессирование, что составляет 0,54% среди оценивали зубы с невосстановленным кариесом проксимальной эмали. На 1139 других удаленных человеческих зубах под поверхностями, покрытыми зубным камнем, не было обнаружено кариозных поражений.Эти наблюдения дополнительно подтверждают потенциальные защитные эффекты минерализации зубного камня от кариеса.

Благодарности

Все авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов относительно этого исследования. Поддержка этого исследования была частично предоставлена за счет средств для внутреннего проекта Z01 DE 00096-07 в Национальном институте стоматологических и черепно-лицевых исследований, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд, США, а также за счет средств, предоставленных Полом Х. Кизом (Paul H. Keyes Term Professorship) в США. Пародонтология проводилась в 2003-2013 гг. Томасом Э.Рамс в стоматологической школе университета Темпл, Филадельфия, Пенсильвания, США.

Список литературы

Mandel ID (1995) Обновление исчисления: распространенность, патогенность и профилактика. J Am Dent Assoc 126: 573-580.
van Palenstein Helderman WH, Lembariti BS, van der Weijden GA, van ‘t Hof MA (1998) Рецессия десны и ее связь с камнем у субъектов, лишенных профилактической стоматологической помощи. J Clin Periodontol 25: 106-111.
Tu YK, Gilthorpe MS, Griffiths GS, Maddick IH, Eaton KA и др.(2004) Применение многоуровневого моделирования в анализе продольных пародонтальных данных — часть I: абсолютные уровни заболеваемости. J Periodontol 75: 127-136.
Anerud A, Löe H, Boysen H (1991) Естественная история и клинический курс образования зубного камня у человека. J Clin Periodontol 18: 160-170.
Albandar JM, Kingman A, Brown LJ, Löe H (1998) Воспаление десен и поддесневой камень как детерминанты прогрессирования заболевания при пародонтите с ранним началом. J Clin Periodontol 25: 231-237.
Calabrese N, Galgut P, Mordan N (2007) Идентификация Actinobacillus actinomycetemcomitans, Treponema denticola и Porphyromonas gingivalis в зубном камне человека: пилотное исследование. J Int Acad Periodontol 9: 118-128.
Nichols FC, Rojanasomsith K (2006) Липиды Porphyromonas gingivalis и пораженные ткани зубов. Устный микробиол иммунол 21: 84-92.
Аллен Д.Л., Керр Д.А. (1965) Тканевая реакция морской свинки на стерильный и нестерильный камень. J Periodontol 36: 121-126.
Listgarten MA, Ellegaard B (1973) Электронно-микроскопические доказательства клеточного прикрепления между соединительным эпителием и зубным камнем. J Periodont Res 8: 143-150.
Fitzgerald RJ, Keyes PH (1960) Демонстрация этиологической роли стрептококков в экспериментальном кариесе у хомяков. J Am Dent Assoc 61: 9-19.
Keyes PH (1960) Инфекционная и трансмиссивная природа экспериментального кариеса зубов. Выводы и последствия. Arch Oral Biol 1: 304-320.
Selwitz RH, Исмаил А.И., Питтс Н.Б. (2007) Кариес зубов.Ланцет 369: 51-59.
White DJ (1997) Зубной камень: недавние исследования возникновения, образования, предотвращения, удаления и воздействия на здоровье полости рта наддесневых и поддесневых отложений. Eur J Oral Sci 105: 508-522.
Fitzgerald RJ, McDaniel EG (1960) Зубной камень у стерильной крысы. Arch Oral Biol 8: 239-240.
Леонард HJ (1926) Современные концепции пародонтоклазии (I). Дент Космос 68: 145-150.
Дакворт Р.М., Хантингтон Э. (2006) О связи между камнем и кариесом.В: Дакворт Р.М. (Эд). Зубы и их окружение. Каргар, Базель, 19: 1-28.
Дакворт Р.М., Хантингтон Э. (2005) Доказательства того, что исчисление: обратная зависимость кариеса работает. Community Dent Oral Epidemiol 33: 349-356.
Леви Б.М. (1962) Обсуждение зубного камня, зубного налета и импакции. J Dent Res 41: 312-316.
Boyd JD, Drain CL (1928) Остановка кариеса зубов в детстве. J Am Med Assoc 90: 1867-1899.
Keyes PH, Jordan HV (1964) Поражения пародонта у сирийских хомяков.III. Сведения, относящиеся к инфекционному и трансмиссивному компоненту. Arch Oral Biol 9: 377-400.
Keyes PH (1968) Одонтопатические инфекции. В: Hoffman RA, Robinson PF, Magalhaes H, (Eds). Золотой хомяк: его биология и использование в медицинских исследованиях. Эймс: Издательство государственного университета Айовы, США, стр. 253–382.
Driessens FC, Theuns HM, Heijligers HJ, Borggreven JM (1987) Электронные микрозонды и микрорадиографические исследования кариозных поражений эмали, покрытых зубным камнем. J Biol Buccale 15: 183-187.
Tanzer JM, Grant LP, McMahon T, Clinton D, Eanes ED (1993) Одновременная индукция кариеса и образование зубного камня у крыс. J Dent Res 72: 858-864.
de Sousa FB, Mangueira PJ, Tames DR, Vianna SS, Santos-Magalhaes NS (2013) Сопутствующий кариес и образование зубного камня на модели кариеса дентина in situ. F1000Res 2: 3.
König KG (1968) Кариес и зубной камень у крыс, подвергнутых чередованию кормления неочищающей кариесогенной пищей и очищающей некариесогенной диетой. Helv Odontol Acta 12: 26-30.
Скиннер Б. (2003) Дилемма диеты Аткинса. Br Dent J 195: 231.
Loesche WJ (1986) Роль Streptococcus mutans в разрушении зубов у человека. Microbiol Rev 50: 353-380.
Dawes C (1970) Влияние диеты на секрецию и состав слюны. J Dent Res 49: 1263-1273.
Сидавей Д.А. (1978) Микробиологическое исследование зубного камня. I. Микробная флора зрелого камня. J. Periodont Res 13: 349-359.
Mühlemann HR (1968) Измерение зубного камня in vivo.Энн Н. И Акад. Sci 153: 164-196.
Keyes PH, Shern RJ (1971) Химические адъюванты для контроля и профилактики заболеваний зубного налета. J Am Soc Prevent Dent 1: 18-20.

Количественный анализ разнообразных видов лактобацилл, присутствующих при прогрессирующем кариесе зубов

РЕФЕРАТ

Наш предыдущий анализ 65 распространенных кариесных поражений зубов традиционными методами культивирования показал, что лактобациллы были многочисленными на переднем фронте прогрессирующего поражения.Производство органических кислот лактобациллами считается важным фактором декальцификации дентинного матрикса. Настоящее исследование было предпринято для более точного определения разнообразия лактобацилл, встречающихся в этой среде, и для количественной оценки основных видов и филотипов относительно общей нагрузки лактобацилл с помощью ПЦР в реальном времени. Объединенную ДНК амплифицировали с помощью ПЦР с праймерами, специфичными для рода Lactobacillus , для последующего клонирования, секвенирования и филогенетического анализа. На основе сравнения последовательностей рибосомной ДНК 16S было обнаружено 18 различных филотипов лактобацилл, включая сильное представление как новых, так и желудочно-кишечных филотипов.Специфические праймеры ПЦР были разработаны для девяти известных видов, включая Lactobacillus gasseri , L. ultunensis , L. salivarius , L. rhamnosus , L. casei , L. crispatus , L. delbrue , L. fermentum и L. gallinarum . Было идентифицировано более трех различных видов, присутствующих в большинстве образцов дентина, что подтверждает широкое распространение и численное значение различных видов Lactobacillus spp.в кариозном дентине. Количественная оценка с помощью ПЦР в реальном времени выявила различные пропорции девяти видов, колонизирующих кариозный дентин, с более высокими средними концентрациями L. gasseri и L. ultunensis , чем у других распространенных видов. Полученные данные служат основой для дальнейшей характеристики патогенности Lactobacillus spp. в контексте распространения кариозного поражения.

Кариес зубов продолжает оставаться серьезной проблемой общественного здравоохранения во многих частях мира.Хотя бактерии, ответственные за инициирование кариеса и раннее развитие кариеса, были тщательно изучены, микробиология кариеса дентина, как сообщается, демонстрирует значительное разнообразие и еще не полностью охарактеризована. Растворение кислотой поверхности эмали обнажает лежащую под ней бессосудистую минерализованную соединительнотканную матрицу дентина, которая склонна к инвазии. Это происходит за счет миграции бактерий в сеть канальцев, занятых отростками одонтобластов пульпы.Ранняя стадия инвазии включает лактобациллы, Actinomyces, spp., Veillonellae и стрептококки mutans (обзор см. В ссылке 19). За этой фазой следует вторжение более разнообразной группы микроорганизмов, включая грамотрицательные анаэробы. Есть данные, что межвидовая кооперация усиливает миграцию смешанной бактериальной флоры через дентинные канальцы (20, 27).

Сообщается, что лактобациллы в большом количестве встречаются как при поверхностном, так и при глубоком кариесе (9), хотя не предполагается, что они участвуют в бактериальной инвазии необлученной пульпы зуба (12).Наш предыдущий анализ лактобацилл путем культивирования в микроаэрофильных условиях в 65 образцах с глубоким кариесом показал, что Lactobacillus acidophilus численно преобладали, хотя Lactobacillus paracasei , Lactobacillus rhamnosus и Lactobacillus rhamnosus , и Lactobacillus многообактерий также присутствовали в образцах Lactobacillus (Lactobacillus many). . В настоящем исследовании анализ образцов с помощью количественных молекулярных методов показал большее количество и неожиданное разнообразие лактобацилл, представленных видами, которые обычно не встречаются в полости рта.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Бактериальные штаммы. Лактобациллы (таблица 1) были получены из коллекции Института стоматологических исследований и Австралийского центра исследования заквасок (Верриби, Виктория, Австралия) и культивированы в среде MRS (Oxoid, Бейзингсток, Соединенное Королевство). ). Другие бактерии культивировали, как описано ранее (26).

ТАБЛИЦА 1.

Штаммы бактерий и специфичность праймеров для обнаружения бактерий с помощью ПЦР.

Образцы кариозного дентина.Источником материала для анализа послужила коллекция кариозного дентина из 65 удаленных зубов, описанная ранее (протокол одобрен Комитетом по этике человека Службы здравоохранения Центрального Сиднея) (22, 26). Пациенты выбрали удаление не реставрированных зубов, которые представляли большой коронарный кариес дентина, который при макроскопическом исследовании не проникал в подлежащую жизнеспособную ткань пульпы и имел прилегающую глубину зондирования пародонта менее 4 мм. Кариозную зону декальцинированного и частично декальцинированного дентина в непосредственной близости от продвигающегося фронта поражения в каждом зубе выкапывали, взвешивали и ресуспендировали в восстановленной транспортной жидкости (10 мг [сырого веса] дентина на мл) при 37 ° C внутри зуба. анаэробная камера.Фрагменты кариозного дентина сначала диспергировали в восстановленной транспортной жидкости путем встряхивания в течение 20 с с последующей гомогенизацией вручную в 2-миллилитровом стеклянном гомогенизаторе в течение 30 с перед экстракцией бактериальной ДНК (22).

Нижележащая ткань пульпы была исследована на предмет патологических изменений и классифицирована по преобладающим проявлениям практически нормальной гистологии (категория 1), гиалиновой дегенерации мягких тканей (категория 2), обширной кальцификации (категория 3) или инфильтрации воспалительных клеток (категория 4). (22).

Выделение ДНК. ДНК выделяли из кариозного дентина, как описано ранее (22), с помощью буферного реагента ATL (Qiagen, Клифтон-Хилл, Виктория, Австралия), который эффективно высвобождает ДНК из грамотрицательных бактерий и организмов, культивируемых в анаэробных условиях. . ДНК экстрагировали из эталонных штаммов Lactobacillus (таблица 1) с помощью мини-набора QIAamp DNA (Qiagen) в соответствии с инструкциями производителя.

Праймеры и условия ПЦР. Праймеры, специфичные для рода Lactobacillus , были сконструированы из областей идентичности в последовательности 16S рибосомной ДНК (рДНК) из широкого разнообразия Lactobacillus spp.(Инвентарные номера GenBank в скобках): Lactobacillus acetolerans (M58801 ), Lactobacillus alimentarius (M58804 ), Lactobacillus amylolyticus (Y17361 ), Lactobacillus amylophilus (M58806 ), Lactobacillus animalis (M58807 ), Lactobacillus aviarius (M58808 ), Lactobacillus bifermentans (M58809 ), Lactobacillus brevis (M58810 ), Lactobacillus buchneri (M58811 ), Lactobacillus casei (AY196975 ), Lactobacillus collinoides (AB005893 ), Lactobacillus crispatus (AF257097 ), Lactobacillus delbrueckii (AJ414691 ), л.fermentum (AF302116), Lactobacillus fructivorans (M58818 ), Lactobacillus gallinarum (AJ417737 ), Lactobacillus gasseri (AF519171 ), Lactobacillus iners (Y16329 ), Lactobacillus jensenii (AF243176 ), Lactobacillus lactis (M58823 ), Lactobacillus lindneri (X95423 ), Lactobacillus manihotivorans (AF000162 ), Lactobacillus mucosae (AF126738 ), Lactobacillus nagelii (Y17500 ), Lactobacillus oris (X94229 ), Lactobacillus perolens (Y19168 ), Lactobacillus plantarum (AL935253 ), Lactobacillus pontis (X76329 ), Lactobacillus reuteri (L23507 ), л.рамнозус (AF243146 ), Lactobacillus sakei (M58829 ), Lactobacillus salivarius (AF089108 ), Lactobacillus sharpeae (M58831 ), Lactobacillus vaginalis (AF243177 ) и Lactobacillus zeae (D86516 ).

Последовательности были извлечены из GenBank и сопоставлены с clustal w (35) вместе с последовательностями таксономически родственных бактерий Bacillus subtilis (AB016721) , Staphylococcus aureus (SA16SRRN) , Listeria monocytogenes, 55 (CBA16S) , Peptostreptococcus micros (PEP16SRR8), Streptococcus mutans (SM16SRNA), Enterococcus faecalis (AB012212) и Pediococcus acidilactici (X95976127) (X95976127).Последовательности выбранных для Lactobacillus праймеров LactoF и LactoR показаны в таблице 2. Специфичность последовательностей праймеров определялась поиском гомологии BLAST (1) на короткие, почти точные совпадения в GenBank. Доступ к BLAST осуществлялся через Австралийскую национальную службу геномной информации (ANGIS; http://www.angis.org.au). ). Специфичность праймеров была подтверждена с помощью ПЦР на шаблонах ДНК из таксономически родственных и неродственных бактерий в 25 мкл реакционных смесей, содержащих 1 × HotStarTaq Master Mix (Qiagen), 2 мкл матрицы (≈40 нг ДНК) и 100 нМ ( каждый) грунтовка.ПЦР выполняли с помощью системы GeneAmp PCR System 9700 (Perkin Elmer, Веллесли, Массачусетс) с начальной стадией денатурации 95 ° C в течение 15 минут, с последующими 40 циклами при 95 ° C в течение 15 с и 62 ° C в течение 1 минуты. Аликвоту 10 мкл ПЦР подвергали электрофорезу в 2% агарозном геле, содержащем бромид этидия, и полосы ДНК визуализировали с помощью УФ-освещения.

Количественная оценка в реальном времени общей нагрузки Lactobacillus в кариозном дентине. Количественные ПЦР проводили в реакционном объеме 25 мкл, содержащем 1 × SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, Calif.), По 100 нМ каждого из праймеров LactoF и LactoR и 2 мкл ДНК, экстрагированной из образцов кариозного дентина. Количество ДНК в 65 образцах кариозного дентина определяли в трех повторностях и рассчитывали средние значения. Амплификацию и обнаружение ДНК проводили с помощью системы обнаружения последовательностей ABI-Prism 7700 (Applied Biosystems) с 96-луночными ПЦР-планшетами оптического качества и оптическими колпачками. Условия реакции: 50 ° C в течение 2 минут и 95 ° C в течение 10 минут, затем 40 циклов при 95 ° C в течение 15 с и 62 ° C в течение 1 минуты.Анализ данных проводился с помощью программного обеспечения для обнаружения последовательностей версии 1.6.3, поставляемого Applied Biosystems.

Очищенная геномная ДНК в диапазоне от 10 фг до 1 нг Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus (ATCC 11842) использовали в качестве стандарта для определения количества ДНК Lactobacillus с помощью ПЦР в реальном времени. Это было эквивалентно приблизительно от 4,0 до 4,0 × 10 ⁵ копий генома (размер генома 2,3 Мб). Концентрации ДНК определяли с помощью набора для количественного анализа двухцепочечной ДНК PicoGreen (Molecular Probes, Eugene, Oreg.) и люминесцентный спектрометр модели LS 50B (Perkin Elmer).

Подсчет видов Lactobacillus . Праймеры, специфичные для определенного вида или филотипа, были сконструированы из вариабельной области V1 или V2 (28) на основе выравнивания последовательностей вышеупомянутых последовательностей Lactobacillus вместе с представителями основных идентифицированных филотипов из профиля разнообразия Lactobacillus . В большинстве случаев не удавалось создать конкретный комплементарный праймер, и использовали праймер LactoF или LactoR (таблица 2).Для L. gasseri обратный праймер был разработан из области V3. Специфичность проверяли BLAST-анализом баз данных последовательностей и подтверждали с помощью ПЦР (таблица 1). Праймеры ПЦР не могли быть сконструированы для дифференциации Lactobacillus ultunensis и орального клона Lactobacillus , представленного L5 (рис. 1), поскольку их последовательности ампликона 16S рДНК различались в среднем только на 1,5%. Поэтому общий прямой праймер, LultF, был разработан так, чтобы быть специфичным для обоих этих видов или филотипов.

РИС. 1.
Соседнее дерево видов и филотипов Lactobacillus , идентифицированных из 58 образцов кариозного дентина, на основе 100 последовательностей Lactobacillus -специфического ампликона 16S рРНК (≈400 п.н.) и близкородственных участков ампликона из Lactobacillus Последовательности гена 16S рРНК в GenBank (номера доступа в скобках). Последовательности были выровнены с clustalw, и матрица расстояний была рассчитана с помощью алгоритма Джукса-Кантора. Заштрихованные прямоугольники рядом с репрезентативной последовательностью соответствуют количеству клонов различных Lactobacillus spp.или выявленные филотипы. Lactobacillus spp. или филотипы, количественно определенные с помощью ПЦР в реальном времени в образцах кариозного дентина, помечаются используемыми парами праймеров, специфичными для вида. Было определено, что новые филотипы (*) отличаются более чем на 2% при сравнении последовательностей их ампликонов 16S рДНК от их ближайших родственных видов. Значения начальной загрузки (> 50) возле узлов представлены в процентах от 100 повторений. Филогенетическое дерево было укоренено в соответствующей области ампликона последовательности гена 16S рРНК E.coli K-12 штамм MG1655. Масштабная линейка представляет генетическое расстояние. Праймеры для ПЦР

были разработаны так, чтобы быть оптимальными для ПЦР в реальном времени и для амплификации последовательностей в пределах диапазона размеров, определяемого с помощью этой системы. Анализ ПЦР в реальном времени проводился с использованием смеси SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems) с системой определения последовательности ABI-Prism 7700 (Applied Biosystems). Для количественного определения L. casei (включая Lactobacillus paracasei ), L.crispatus , L. delbrueckii , L. fermentum , L. gallinarum , L. gasseri , L. rhamnosus и L. salivarius , очищенная геномная ДНК из штаммов paraspcasei Lactobacillus . paracasei (ATCC 25302), L. crispatus (ATCC 33820), L. delbrueckii subsp. bulgaricus (ATCC 11842), L. fermentum (ATCC 14931), L. gallinarum (ATCC 33199), L.gasseri (ATCC 33323), L. rhamnosus (ATCC 7469) и Lactobacillus salivarius subsp. salivarius (ATCC 11741), соответственно, использовали в качестве стандартов в серии 10-кратных разведений в диапазоне от 10 фг до 1 нг ДНК. Для количественной оценки L. ultunensis и родственного ему филотипа очищенную плазмидную ДНК, содержащую соответствующую вставку 16S рДНК L. ultunensis , использовали в качестве стандарта в серии 10-кратных разведений в диапазоне от 100 мкг до 10 пг. ДНК.Стандартные концентрации ДНК определяли с помощью набора для количественного анализа двухцепочечной ДНК PicoGreen (Molecular Probes), как описано выше.

Расчет количества бактериальных клеток. Преобразование количества ДНК Lactobacillus в образцах кариозного дентина, определенных с помощью ПЦР в реальном времени, в теоретические эквиваленты генома требовало предположения, что размер генома и количество копий гена 16S рРНК для всех лактобацилл были одинаковыми. . Из обзора Klaenhammer et al. (16) текущих и завершенных проектов по геномному секвенированию Lactobacillus средний размер генома лактобацилл, обычно обнаруживаемых в ротовой полости людей, оценивается как 2.2 МБ, так что каждая клетка содержит примерно 2,4 фг ДНК.

Идентификация ампликонов рДНК Lactobacillus 16S. ДНК из 58 из 65 образцов кариозного дентина разводили в стерильном H ₂ O, чтобы содержать 20 пг ДНК Lactobacillus , мкл ^-1, и объединяли. Семь образцов, содержащих <50 пг ДНК Lactobacillus (мг [сырого веса] дентина) ^-1, были исключены.

ПЦР объединенных образцов кариозного дентина проводили с праймерами UniF и LactoR (таблица 2), как описано выше, за исключением того, что использовали 30 циклов амплификации и 50 мкл реакционных объемов.Аликвоты (10 мкл) из четырех независимых ПЦР проверяли электрофорезом в 2% агарозных гелях, содержащих бромид этидия, с последующей визуализацией при УФ-освещении для подтверждения генерации ампликонов размером ≈400 п.н. Амплифицированную ДНК объединяли, очищали с помощью набора UltraClean PCR Clean-up (Mo Bio Laboratories, Карлсбад, Калифорния) и лигировали в линеаризованные векторы pGEM-T Easy (Promega, Сидней, Новый Южный Уэльс, Австралия) в соответствии с инструкциями производителя. протокол.

Трансформацию проводили с помощью электрокомпетентных клеток Escherichia coli XL-1 Blue и высевали на чашки с агаром Лурия-Бертани с добавлением 25 мкг ампициллина мл. ^-1, 30 мкг 5-бром-4-хлор-3-индолила. -β-d-галактопиранозид (X-Gal) мл ^-1 и 20 мкг изопропил-β-d-тиогалактопиранозида (IPTG) мл ^-1 и инкубировали в течение ночи при 37 ° C.Белые трансформанты отбирали случайным образом, переносили в среду Лурия-Бертани в 15-мл пробирки или 2,2-мл планшеты с глубокими лунками и выращивали при встряхивании в течение 18 ч при 37 ° C. Плазмидную ДНК экстрагировали индивидуально с помощью набора Wizard Plus SV miniprep (Promega) или в 96-луночных блоках с помощью системы прямого связывания Perfectprep Plasmid 96 Vac (Eppendorf, North Ryde, New South Wales, Australia) с коллектором Perfect Vac (Eppendorf). ). Очищенные плазмиды, содержащие клонированные ампликоны 16S рДНК, секвенировали циклическим секвенированием в Центре секвенирования ДНК Вестмида в больнице Вестмид, Вентвортвилл, Новый Южный Уэльс, Австралия.Все клоны секвенировали с использованием праймера для последовательности промотора Т7, чтобы обеспечить полное покрытие вставки размером ≈400 п.н.

Анализ последовательностей ампликонов рДНК lactobacillus 16S. Последовательности сравнивали с последовательностями гена 16S рРНК в проекте Ribosomal Database Project (6) и в GenBank для выявления связанных последовательностей в базах данных. Последовательности, у которых было обнаружено ≥99% идентичности, были сгруппированы, и репрезентативные последовательности были выровнены с последовательностями 16S рДНК близкородственных Lactobacillus spp.в GenBank с помощью CLUSTALW (35). Матрица расстояний была рассчитана с помощью DNADIST с использованием модели Джукса-Кантора (15), а филогенетическое дерево было построено методом объединения соседей Сайто и Ней (31) с помощью NEIGHBOR. Соответствующий участок последовательности 16S рДНК E. coli использовали для укоренения филогенетического дерева. Филогенетические данные были подвергнуты загрузочному анализу 100 повторов с помощью SEQBOOT и consense, доступ к которым осуществлялся через ANGIS.

Возможные химерные структуры среди последовательностей, которые были идентифицированы программой chimera_check, доступной через Ribosomal Database Project (6) или путем визуального обнаружения аномальной кластеризации в филогенетическом дереве, были исключены из анализа.

Статистический анализ Корреляция между Lactobacillus sp. и между лактобациллами и тканями пульпы определяли непараметрический тест Спирмена. Различия были проанализированы непараметрическим анализом с помощью теста Фрейдмана, за которым последовал пост-тест Данна для сравнения нескольких парных выборок.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Специфичность праймеров LactoF и LactoR. Специфичность праймеров, специфичных для рода Lactobacillus , оценивали с помощью ПЦР с ДНК, очищенной из штаммов, перечисленных в таблице 1.Для всех 21 протестированных штаммов Lactobacillus был получен продукт ПЦР длиной ≈230 п.н. При тестировании против штаммов Lactobacillus , отличных от , при температуре отжига 62 ° C не было образовано ампликонов, что подтверждает специфичность праймеров. LactoF и LactoR почти идентичны по последовательности первичным праймерам Lactobacillus , разработанным McOrist et al. (25) для обнаружения лактобацилл в образцах фекалий человека и, следовательно, также предполагается, что они исключают ДНК бактерий, обычно выделяемых из желудочно-кишечного тракта человека.

Количественное определение общей ДНК Lactobacillus с помощью ПЦР в реальном времени. ДНК Lactobacillus была обнаружена во всех 65 образцах кариозного дентина, и количественная оценка с помощью ПЦР в реальном времени показала, что она варьировала от 25 пг до 359 нг (мг [сырого веса] дентина) ^-1 (Таблица 3). В пересчете на теоретическое количество клеток эти значения соответствовали уровням лактобацилл в кариозных поражениях в диапазоне от 1,0 × 10 ⁴ до 1,4 × 10 ⁸ клеток (мг [влажная масса] дентина) ^-1 (Таблица 3 ).По сравнению с количеством Lactobacillus КОЕ для каждого образца дентина (22), значения, полученные с помощью ПЦР в реальном времени, были в среднем в 34 раза выше.

ТАБЛИЦА 3.
Лактобактерии, обнаруженные в кариозном дентине с помощью ПЦР в реальном времени
Разнообразие лактобацилл в кариозном дентине. В отличие от традиционных методов культивирования, используемых для определения видов, последовательности ампликона 16S рДНК могут определять сходство между филотипами или видами, когда Последовательности ампликонов 16S рДНК различаются не более чем на 1%.Таким образом, филогенетические выводы среди 100 последовательностей ампликона 16S рДНК Lactobacillus , полученных из кариозного дентина, можно сравнить с эквивалентными областями эталонных последовательностей 16S рДНК известных видов и филотипов (рис. 1). Однако, поскольку анализ был основан на последовательности ≈400 пар оснований, включающей области V1 и V2 гена 16S рРНК, филогенетическое дерево дает только представление о разнообразии и родственных связях Lactobacillus spp. обнаружены в образцах кариозного дентина.Филогенетические дистанции между видами или филотипами не могут быть действительно репрезентативными для генетических дистанций между видами, если для анализа использовались полные последовательности гена 16S рРНК (13).
Значительное разнообразие было обнаружено среди 100 последовательностей ампликона 16S рДНК Lactobacillus Lactobacillus . На основании определения, что последовательности 16S рДНК филотипов отличаются друг от друга на ≥2% нуклеотидных сайтов в амплифицированной области, было идентифицировано 18 различных филотипов.Среди них 12 филотипов показали ≥99% идентичности с последовательностями ампликона 16S рДНК известных лактобацилл. Остальные филотипы были либо новыми видами, либо демонстрировали родство с не охарактеризованными лактобациллами из различных сред.
Среди 100 последовательностей ампликона 16S рДНК Lactobacillus наиболее часто идентифицируемым видом был L. gasseri , представленный 28 случайно выбранными клонами. Затем последовали L. rhamnosus (13 клонов) и возможный новый оральный Lactobacillus sp., L5, представленный 12 клонами. Другими видами, которые также были идентифицированы с большей частотой, были L. crispatus , L. casei , L. ultunensis (каждый представлен семью клонами) и L. salivarius (пять клонов).

Novel Филотипы Lactobacillus в кариозном дентине Несколько последовательностей были обнаружены несколько раз среди секвенированных клонов, которые были либо новыми видами, либо филотипами (рис. .Третий наиболее часто выделяемый ампликон 16S рДНК, новый филотип Lactobacillus , представленный L5 (12 клонов), показал одно нуклеотидное различие по последовательности длиной 393 п.н. от некультивируемой Lactobacillus sp. идентифицированы в полости рта человека (инвентарный номер GenBank AY349383). ) (Б. Дж. Пастер, неопубликованные данные). Близким родственником является ампликон 16S рДНК длиной 391 п.н. из филотипов Lactobacillus , представленных L86 (7 клонов), который был идентичен последовательности рДНК 16S из L.ultunensis , который недавно был выделен из слизистой оболочки желудка человека (номер доступа в GenBank AY253660). ) (С. Роос, неопубликованные данные).

Другой новый филотип в группе L. acidophilus включал три клона, представленных L84 (рис. 1), который был наиболее тесно связан с некультивируемой бактерией из желудочно-кишечного тракта свиньи (18) и, вероятно, представлял новый вид. В пределах 395 п.н. эти последовательности различались в среднем всего на 2%, но на 3% отличались от наиболее близкородственной 16S рДНК — последовательности L.gallinarum.

Кроме того, в группе L. acidophilus были клоны L33, L80 и L97 (рис. 1), чьи последовательности ампликона 16S рДНК различались в среднем на 0,7%. Эти три клона могут также представлять новый вид, поскольку их последовательности ампликона 16S рДНК отличались на 2% от таковых у L. crispatus , ближайшего родственного известного вида, уровня различия, достаточного для классификации вида в пределах L. acidophilus. группа.

Распространение основных видов лактобацилл в образцах кариозного дентина.Качественный скрининг 65 образцов кариозного дентина с помощью ПЦР-анализа с видоспецифичными наборами праймеров (таблица 2) показал, что в большинстве образцов дентина присутствовали по крайней мере три различных вида или филотипа. Качественный анализ показал, что представители группы L. casei , которая включает L. casei , L. paracasei и L. rhamnosus , были наиболее распространенными видами, присутствующими в 68% проб. . L. rhamnosus и L.casei / L. paracasei были обнаружены в 54 и 40% проб соответственно. В порядке убывания другими преобладающими видами или филотипами, идентифицированными в дентине, были L. salivarius (60%), L. gasseri (54%), L. ultunensis и родственный филотип (52%) и L. . crispatus (45%). Менее распространены были L. fermentum (22%), гетероферментативный вид, часто связанный с возникновением кариеса зубов (4, 21, 33), L.gallinarum (9%) и L. delbrueckii (6%) .

Подсчет видов и филотипов Lactobacillus . Среди наиболее распространенных видов, идентифицированных популяционным анализом объединенной ДНК (рис. 1), анализ ПЦР в реальном времени показал, что L. gasseri и L. ultunensis (и его родственного филотипа) присутствовали в большем количестве, чем другие виды, со средними нагрузками 8,7 × 10 ⁶ и 8,1 × 10 ⁶ клеток (мг [влажная масса] дентина) ^-1, соответственно (Таблица 3) . L. gasseri и L. ultunensis также содержали самые высокие уровни любых лактобацилл в любом образце, с уровнями до 8,0 × 10 ⁷ и 7,4 × 10 ⁷ клеток (мг [сырого веса] дентина ) ^-1, соответственно (Таблица 3), предполагая связь между этими видами и распространенным кариесом зубов. В нескольких образцах кариозного дентина эти два преобладающих вида также составляли большинство из Lactobacillus spp.настоящее время. Было обнаружено, что L. ultunensis (и родственный ему филотип) составляют 84 и 68% от общей нагрузки Lactobacillus в образцах E32 и E35, соответственно (рис. 2). В образце E56 L. ultunensis составляли приблизительно 90% от общей нагрузки Lactobacillus . Аналогичным образом было обнаружено, что L. gasseri составляют 91 и 58% от общей нагрузки Lactobacillus в образцах E64 и E65, соответственно (рис. 2).

РИС. 2.
Графическое представление загрузок ДНК девяти преобладающих видов или филотипов Lactobacillus в кариозном дентине, определенных с помощью ПЦР в реальном времени.Показаны 40 образцов с наибольшей суммарной нагрузкой Lactobacillus . Разница в общей загрузке Lactobacillus с кумулятивным итогом девяти видов в каждом образце (называемых неизвестными) объяснялась присутствием других, менее распространенных видов Lactobacillus spp. которые не были определены количественно с помощью ПЦР в реальном времени. Образцы пациентов указаны на оси x .
Средние нагрузки других распространенных видов варьировали от 9,5 × 10 ⁵ клеток (мг [сырой вес] дентина) ^-1 для л.casei от до 3,8 × 10 ⁶ клеток (мг [сырого веса] дентина) ^-1 для L. salivarius (таблица 3). Хотя менее распространенные виды L. fermentum , L. gallinarum и L. delbrueckii присутствовали в меньшем количестве образцов, когда они были обнаружены, они составляли сопоставимые нагрузки.
Связь между нагрузкой Lactobacillus и специфическими видами Lactobacillus и гистопатологией пульпита. Пульпа из 65 кариозных зубов была разделена на четыре гистопатологические категории на основе доминирующей патологии, описанной ранее (22).В каждой из четырех гистопатологических категорий был проведен многомерный анализ средних значений нагрузок ДНК, оцененных с помощью ПЦР в реальном времени для всех лактобацилл и для различных видов с помощью теста Фрейдмана. Для общей нагрузки лактобацилл не наблюдалось статистически значимой связи с гистологической категорией ответа пульпы. Точно так же нет значимых взаимосвязей между различными Lactobacillus spp. и гистологический ответ не были обнаружены.
Возможные отношения между парами Lactobacillus spp. в каждом образце кариозного дентина определяли с помощью корреляции Спирмена (Таблица 4). Для большинства ассоциаций коэффициенты корреляции ( r ) были низкими и незначимыми ( P > 0,05). Однако анализ выявил множественные положительные ассоциации между L. gasseri и L. salivarius с другими Lactobacillus spp. осмотрел. Некоторые из этих ассоциаций оказались значимыми, например.g., L. gasseri и L. salivarius ( r = 0,5434, P <0,0001) и L. gasseri и L. rhamnosus ( r = 0,5313, P < 0,0001), что указывает на то, что присутствие одного из этих видов в кариозном участке было связано с колонизацией и размножением других видов.
ТАБЛИЦА 4.
Корреляции между видами Lactobacillus в кариозном дентине
Когда пары Lactobacillus spp.в рамках четырех гистопатологических категорий были проанализированы отдельно, было выявлено несколько значимых взаимосвязей (Таблица 5), указывающих на то, что положительные ассоциации между некоторыми Lactobacillus spp. коррелируют с изменениями в прогрессировании заболевания. Интересно, что при всех гистопатологических состояниях наблюдалась положительная связь между L. gasseri и другим видом.
ТАБЛИЦА 5.
Корреляции между видами Lactobacillus, и гистопатологическими категориями ^a
Присутствие других лактобацилл в кариозном дентине.Сравнение общей ДНК Lactobacillus с кумулятивным вкладом отдельных видов показало, что значительный компонент нагрузки Lactobacillus оставался неидентифицированным в нескольких образцах (рис. 2). Хотя различия в количестве ДНК Lactobacillus могут быть связаны с различиями в размерах генома и / или количестве копий генов 16S рРНК по сравнению с таковым у L. delbrueckii subsp. bulgaricus , который использовался в качестве стандарта, в некоторых поражениях была значительная доля необнаруженных видов, таких как образцы E25 и E73, где 74 и 61%, соответственно, от общей нагрузки Lactobacillus оставались неучтенными. (Рис.2). Случайное клонирование и секвенирование ампликонов 16S рДНК в образцах, содержащих высокие доли неизвестных лактобацилл, выявило присутствие видов лактобацилл, отличных от преобладающих видов, определенных путем объединения образцов кариозного дентина (данные не показаны). В случае образца E25, например, в котором 74% общей нагрузки Lactobacillus было неидентифицировано, 67% последовательностей ампликона 16S рДНК показали идентичность с кластером филотипов, представленным клонами L33, L80 и L97 Lactobacillus . в L.acidophilus (рис.1). Другими видами, присутствующими в этих образцах кариозного дентина, но не идентифицированными среди последовательностей 100 ампликонов 16S рДНК, были Lactobacillus panis , Lactobacillus colehominis и Lactobacillus nagelii (неопубликованные данные). Похоже, что эти виды и другие ранее идентифицированные виды, которые не были определены количественно с помощью ПЦР в реальном времени, скорее всего, составляют неидентифицированные лактобациллы в этих образцах кариозного дентина.
ОБСУЖДЕНИЕ
По сравнению с подсчетом лактобацилл, определенным методами на основе культуры (22), значения, указанные в этом исследовании, определенные с помощью ПЦР в реальном времени, были значительно выше, как было обнаружено ранее с использованием этого метода подсчета (22, 26) . Молекулярные подходы, использованные в этом исследовании, также привели к идентификации 18 различных филотипов лактобацилл. Из них только 12 показали родство с известными Lactobacillus spp., И только около половины из них были сходны с видами, ранее изолированными из ротовой полости человека (2-4, 9, 33).Остальные филотипы были новыми или связаны с некультивируемыми бактериями. Многие из этих новых филотипов были обнаружены в значительном количестве, что указывает на их возможную связь с прогрессированием заболевания. Например, 30% клонов принадлежали к группе L. acidophilus и были либо новыми видами, либо филотипами, либо сходными с видами, не связанными с ротовой полостью человека, такими как клоны L84 и L29 / L72, которые были связаны с некультивируемыми бактерии, обнаруженные в желудочно-кишечном тракте свиней (18).Неспособность обнаружить эти лактобациллы в кариозном дентине методами культивирования может просто отражать трудности, возникающие при различении видов этой группы с помощью стандартных биохимических тестов (8). В качестве альтернативы, члены этой группы могут иметь дополнительные потребности в питательных веществах, которые препятствуют их выращиванию обычными методами.
Хотя метод ПЦР-амплификации и клонирования, использованный в этом исследовании, может искажать отражение микробного разнообразия (38), тот факт, что отдельные образцы дентина были разбавлены для внесения равных количеств ДНК Lactobacillus в объединенный образец перед филогенетическим анализом, означал что числовая частота идентифицированных видов в библиотеке клонов отражает их общее численное преобладание в объединенных образцах кариозного дентина.Таким образом, наиболее численно доминирующими видами в 65 образцах кариозного дентина были L. gasseri , L. rhamnosus и новый филотип Lactobacillus (представленный клоном L5). При использовании классических методов культивирования наиболее часто выделяемыми видами являются L. casei , L. rhamnosus и L. acidophilus (4, 9, 23, 32, 33).
Особо следует отметить, что ни L. brevis , ни L. plantarum не были идентифицированы среди 100 ампликонов 16S рДНК, которые были проанализированы, хотя эти два вида ранее были изолированы в значительном количестве (2, 5, 9, 11, 33).Другие виды, культивируемые из кариозного дентина, включают Lactobacillus coryniformis , L. sakei , L. lactis и L. fermentum (9), тогда как те, которые были идентифицированы с низкой частотой в текущем исследовании, показали филогенетическое родство с лактобациллами, не обычно обнаруживается в ротовой полости человека. К ним относятся филотипы, выделенные из желудочно-кишечного тракта животных (30), закваска (37), кукурузный силос (17) и полуферментированное вино (7). Исключением был клон L128, который был родственником орального клона CX036, полученного из поддесневой бляшки человека (29).Наличие многочисленных Lactobacillus spp. в объединенном кариозном дентине отражает разнообразные пищевые привычки пациентов (10, 34), которые еще предстоит определить. Некоторые из этих видов были плохо представлены в объединенной выборке, что позволяет предположить их присутствие в небольшом количестве отдельных образцов кариозного дентина.
Среди наиболее распространенных лактобацилл, выявленных с помощью популяционного анализа, в большинстве из 65 образцов кариозного дентина были обнаружены по крайней мере три различных вида или филотипа (рис.2). Это согласуется с предыдущими отчетами о культуральных исследованиях (3). В соответствии с этими предыдущими выводами (4) наиболее распространенными были представители группы L. casei , за которыми следовали L. salivarius , L. gasseri , L. ultunensis (и родственный ему филотип), и L. crispatus . Однако количественная оценка преобладающих видов с помощью ПЦР в реальном времени показала, что L. gasseri и L. ultunensis (и родственный ему филотип) присутствовали в значительно большем количестве, чем другие виды, что согласуется с выводами об их численном преобладании. в объединенном образце кариозного дентина (рис.1 и 2). Эти два вида также составляли большинство лактобацилл, присутствующих в нескольких образцах дентина, что позволяет предположить, что они могут обладать избирательным преимуществом в отношении колонизации и пролиферации разлагающегося дентина. Это мнение согласуется с наблюдением более высокой доли лактобацилл в сильно деминерализованном дентине (36) и их сродством к коллагену I типа (24). Было обнаружено, что другие распространенные виды составляют в образце дентина различные пропорции, и их роль в прогрессировании кариеса нельзя не заметить (рис.2).
В заключение, результаты настоящего исследования указывают на сложное и разнообразное представление лактобацилл в продвигающейся передней части кариозных поражений дентина. Филогенетический анализ, основанный на участках генов 16S рРНК, позволил оценить это разнообразие и обеспечить высокую степень точности при классификации репрезентативных лактобацилл.