Выделение слюны у человека: Повышенное слюноотделение — причины появления, при каких заболеваниях возникает, диагностика и способы лечения — Торговый Дом «Аюрведа»

Разное

Выделение слюны у человека: Повышенное слюноотделение — причины появления, при каких заболеваниях возникает, диагностика и способы лечения

Содержание

УСЛОВНЫЙ РЕФЛЕКС | Энциклопедия Кругосвет

Содержание статьи

Методика Павлова.
Открытия Павлова.
Современные представления.

УСЛОВНЫЙ РЕФЛЕКС. Термин, который впервые был использован русским физиологом И.П.Павловым для описания приобретенного рефлекса, т.е. не являющегося (в отличии от безусловного рефлекса) врожденным, а потому свойственного отдельному индивиду, а не всем представителям данного вида. Когда на язык попадает лимонный сок, выделяется слюна – это безусловный рефлекс. Однако слюна может выделяться также при виде лимона или при звучании слова «лимон» – это условный рефлекс. Различие заключается в том, что вид лимона или звучание этого слова не всегда вызывают выделение слюны и вдобавок могут не оказывать воздействия на тех или иных людей. Подобные стимулы приобретают способность вызывать реакцию лишь после того, как предъявлялись более или менее одновременно со стимуляцией вкусовых рецепторов лимонным соком. Вид лимона или звучание слова «лимон» в этом случае оказываются условными (сигнальными) раздражителями, замещающими безусловный раздражитель – лимонный сок.

Методика Павлова.

Для опыта, осуществленного Павловым, требовалась звукоизолированная комната, где можно было контролировать условия внешней среды, специально оборудованное место для животного и устройство для автоматической подачи пищи. По мере надобности могли предъявляться стимулы разной природы (звонки, вспышки света и т.п.). Посредством несложной хирургической операции Павлов выводил у собаки слюнный проток наружу, так что слюну можно было собирать и измерять ее количество. В типичном эксперименте умеренно голодную собаку несколько раз оставляли в звукоизолированной комнате, чтобы она привыкла к обстановке и не испытывала эмоционального напряжения. В этот период тщательно замерялось выделение слюны, которое обычно бывало незначительным. Затем предъявлялся стимул – включался звонок, что могло вызывать легкое усиление слюноотделения (как следствие открытого Павловым ориентировочного рефлекса), но после нескольких повторений собака обычно теряла к нему интерес. Далее начинался процесс выработки условного рефлекса. Звучал звонок, через несколько секунд в миску собаки падала еда. Пока собака ела, измеряли количество выделившейся слюны, а когда слюноотделение прекращалось, снова звенел звонок и появлялась пища. После нескольких таких сочетаний звонка и пищи проводился следующий эксперимент, в котором звонок не сопровождался появлением пищи. Сигнал, ранее нейтральный, теперь вызывал выраженное слюноотделение – срабатывал условный рефлекс. В подобной ситуации пища является безусловным стимулом, звонок – условным стимулом, или условным сигналом, а совместное появление пищи и звонка называется подкреплением. Само образование условных рефлексов обозначают термином «обусловливание».

Открытия Павлова.

Павлову удалось показать, как возникает условный рефлекс в ответ на разнообразные сигналы и разные типы и условия подкрепления. Кроме того, он обнаружил, что в том случае, когда условный сигнал многократно предъявляется без подкрепления, происходит затухание рефлекса. При этом реакция ослабевает, часто становится нерегулярной, и в конце концов условный сигнал перестает действовать. Павлов показал также наличие поведенческих реакций, связанных с условнорефлекторными реакциями. Например, после того, как была выработана условнорефлекторная реакция слюноотделения на звук звонка определенной высоты, ее удавалось вызвать и звонком с другой высотой звука; в еще одном эксперименте слюноотделение вызывалось почесыванием не только определенного места на лапе, но и соседних участков. В каждом случае степень реакции на новый стимул зависела от того, насколько он был сходен с изначальным стимулом. Звонок, незначительно отличающийся по высоте, или почесывание места, близкого от первоначального, приводили к почти такому же слюноотделению, что и исходные сигналы; сильно отличающийся по высоте звонок или почесывание отдаленного участка вызывали отделение меньшего количества слюны. Как выяснилось, такой эффект, названный генерализацией, можно нейтрализовать, если подкреплять только изначальный сигнал, прекратив подкрепление остальных. В этом случае у животного развивается способность к различению: реакция в полной мере проявляется лишь на первоначальный условный сигнал, а на все другие бывает незначительной или вовсе отсутствует. Используя данную методику, Павлов получил возможность определять, каковы те минимальные изменения стимула, которые способна различить собака.

На основе своих опытов Павлов разработал несколько теорий работы коры головного мозга, в частности теорию возбуждения и торможения – состояний коры, характеризующихся повышенной и пониженной активностью. Он предположил, что торможение, разливаясь по коре, является причиной такого феномена, как затухание условного рефлекса. Павлов считал, что сон – это состояние, при котором торможение полностью захватывает кору головного мозга. Более поздние работы в области неврологии и психофизиологии показали, что работа коры намного сложнее, чем он предполагал (см. также ПАВЛОВ, ИВАН ПЕТРОВИЧ).

Современные представления.

Павлов применял термин «условный рефлекс» к любым индивидуально приобретенным типам поведения. Понятие о сигнальном раздражителе, однако, не объясняет все виды научения. Термин «условный рефлекс» используется теперь в более узком значении, применительно к ситуациям, аналогичным исходным экспериментам Павлова, например к работе вегетативной нервной системы, управляющей деятельностью желез и гладкой мускулатуры. Признается также, что условные рефлексы широко представлены в эмоциональном поведении. Хорошо изучены условные рефлексы человека, возникающие на основе мигательного рефлекса, слюноотделения, потоотделения, сужения и расширения зрачков, сокращения и расслабления гладких мышц стенок кровеносных сосудов. Тем не менее существует значительная область приобретенного поведения, формирующегося на основе иных механизмов. Так, оказалось, что в отличие от условного рефлекса, при котором появлению реакции на условный сигнал всегда предшествует его подкрепление, у животного может сформироваться реакция, которая в прошлом подкреплялась после ее проявления (этот механизм получил название оперантного обусловливания).

Проверь себя!
Ответь на вопросы викторины «Животные»

У какого наземного животного самый большой рот?

Пройти тест

слюнотечение на фоне нервного срыва

Лика

Кандидат медицинских наук

1. 07.20

Просмотры 7,206

1 Слюнотечение на фоне нервного срыва.

1.1 Почему возникает слюнотечение?

1.1.1 Причины постоянного слюновыделения.

1.1.2 Слюнотечение. Диагностика и лечение.

Слюнотечение вызывает неприязнь у множества людей, но не каждый может совладать с самим собой, чтобы остановить течение слюны изо рта. Чаще всего это проявляется у людей, которые находятся в состояниях тревоги или имеют проблемы с сердечным ритмом.

Когда происходят рефлекторные действия, которые не может контролировать человек, под влиянием факторов и причин, в организм поступают сигналы и слюнотечение учащается. Этот сигнал даёт понять, что произошли сбои в теле и в целом жизнедеятельности организма человека.

Многие сразу смотрят за собой, наталкиваясь на постоянное слюновыделение. Врачи такой симптом называют гиперсаливация. Люди, у которых выявлен такой диагноз, выделение слюны учащается, бывают такие ситуации, когда наоборот уменьшается. Обычно это происходит из-за влияния окружающей среды, излишней нервозности, постоянно негативных мыслей.

Причины постоянного слюновыделения.

У взрослых чаще всего гиперсаливация развивается по причине нервного срыва, главная проблема частого выделения слюны у молодых людей, является острый вирус, так же могут на это повлиять хронические ранние болезни, как гайморит.

Однако в современном мире замечено, что участились случаи, когда у юных девушек и мальчиков выделение слюны можно встретить чаще, чем у более взрослого поколения, всё это влияние излишних переживаний, нервных срывов, беспокойных состояний.

Факторы, которые подталкивают на состояние частого слюнотечения:

Побочные эффекты, после принятия лекарств и всевозможных медикаментов, препаратов;
Процесс обмена в теле неравномерный, нарушенный;
Неврологические заболевания;
Оториноларингологические патологии;
Токсикоинфекция, развивается на фоне переживаний, которые происходят изнутри, неблагоприятных мыслей.

Если человек не хочет столкнуться с гиперсаливацией в молодом возрасте, нужно соблюдать некие правила. Находясь в компаниях, в которых напряжённая обстановка, не нужно обращать внимание, избегать, подобного рода встречи. Быть уравновешенным и спокойным, это очень важно. Решать конфликты не на срывах, лучше всю негативную энергетику направлять в спорт. Заняться пробежками, утренними зарядками ежедневно.

Слюнотечение. Диагностика и лечение.

Чтобы избежать всевозможных болезней и симптомов, которые могут возникнуть при слюнотечении, нужно посетить медицинскую клинику. Обязательно обследоваться у врача и посоветоваться с ним на тему того, как лечить, что предпринимать в таких случаях, как избежать постоянных нервозных состояний.

Для того, чтобы выяснить реальную болезнь, по которой возникает частое выделение слюны, нужно посетить терапевта, врач — специалист в последующем осмотре направит в нужном направлении на проверки, сдачу анализов.

Диагностика и врачебные мероприятия, которые стоит пройти:

Собрать все жалобы в один список, наблюдать за симптомами, они возникают из-за обильного слюнотечения;
Проанализировать жизнедеятельность, т.
к. причиной могут являться наследственные болезни, а также привычки, например: курение сигарет;
Проверить в клинике слизистую полость рта;
Сдать анализы на выявление патологий;
Посоветоваться с врачами (невропатолог, эндокринолог, стоматолог и другие).

После диагностирования организма, будет подобрано персональное лечение, чтобы избавиться от обильного слюнотечения. Важно осознавать, что пока не выявится реальная причина болезни, то эффективно излечиться не получится. Если человека тревожит данная проблема, болезнь разрастается, то лучше обратиться к врачу.

У взрослых людей лечение доходит вплоть до удаления слюной железы. Порой такая процедура может привезти к нарушению работоспособности нервных окончаний. Так же, чтобы не нарушать работоспособность других органов, используют массаж для лица, различные терапии, которые способствуют нормализации слюновыделения.

Существует криотерапия, она используется в явных осложнениях. Долгий процесс лечения, но он позволяет участить сглатывание слюны.

У взрослого человека слюновыделение приводит к ненормализованной работе организма. Конечно же, в первую очередь без замедления нужно обратиться к терапевту, который направляет к специалисту более узкого осмотра.

Быстрая и активная борьба с данной проблемой, сможет выявить в скором времени, в чём была проблема, того, что происходит слюнотечение. Беречь нервную систему человеку обязательно, чтобы не вытекало из этого множество заболеваний, при которых вытекают ещё более серьёзные болезни. Из этого следует, что при гиперсаливации следует вылечить все острые и хронические заболевания, т.к. провокацию на процессы, учащённого слюновыделения могут выделить именно они.

Не знаете к кому записаться?

Оставьте контакты и администратор клиники позвонит в ближайшее время и запишет на приём к специалисту.

ЗАДАТЬ ВОПРОС СПЕЦИАЛИСТУ

Написать в WhatsApp

Написать в Telegram

Позвонить +7(495)228-83-83

Наши специалисты

В нашем штате более 75 врачей различных специальностей,
которые позаботятся о вас и вашем здоровье

Андрей

О докторе психолог-консультант по зависимостям, реабилитолог Опыт работы…

Якобишвили Иосиф Ильич

О докторе Врач сосудистый хирург, врач ультразвуковой диагностики…

Фролова Мария Михайловна

Основатель и руководитель многопрофильного медицинского центра Марии Фроловой,…

Кузанов Олег Артемович

О докторе Кардиолог, врач функциональной диагностики, анестезиолог-реаниматолог Опыт…

Гореликов Михаил Алексеевич

О докторе Врач психиатр-нарколог Специализация Дополнительное образование нейропсихолог,…

Андрей

О докторе медбрат Опыт работы — 9 лет…

Все специалисты

Выделение слюны

Здесь рассматривается выделение слюны, вызывающее неудобство.

Слюнные железы — железы в ротовой полости, выделяющие слюну. У человека, кроме многочисленных мелких слюнных желёз в слизистой оболочке языка, нёба, щёк и губ, имеется 3 пары крупных слюнных желёз: околоушная, подчелюстная и подъязычная.

Во рту у здорового человека в течение суток образуется от одного до двух литров слюны, то есть очень много. Слюна смачивает полость рта, способствуя артикуляции, обеспечивает восприятие вкусовых ощущений, смазывает, склеивает и размягчает пережёванную пищу, облегчая глотание. Выделение слюны уменьшается при стрессе, испуге или обезвоживании и практически прекращается во время сна и наркоза. Усиление выделения слюны происходит при действии обонятельных и вкусовых стимулов, а также вследствие механического раздражения крупными частицами пищи и при жевании.

Гиперсаливация (сиалорея, птиализм, слюнотечение) — это увеличение секреции слюнных желез. Как физиологическое явление наблюдается у 3-6 месячных детей.

В более старшем возрасте этот эстетический дефект является заболеванием, которое приносит массу беспокойств и неприятных ощущений. Чаще всего гиперсаливация связана не с истинной гиперпродукцией слюны, а с нарушением рефлекса глотания.

Похожие симптомы: сухость во рту, боль во рту, запах изо рта, заеды в углах рта, сыпь во рту, белый налет во рту, язвы во рту, привкус во рту, выделения из носа.

Причины

Нарушение глотания твердой или жидкой пищи

Переход на симптом»Нарушение глотания»

G93.9

Сначала может протекать бессимптомно.

Затем возможны слабость, головные боли, усиливающиеся под влиянием внешних раздражителей (шума, яркого света) и движении, головокружение, тошнота и рвота, независимые от приема пищи, раздражительность, заторможенность, снижение памяти, судороги, нарушение сознания.

Органическое поражение головного мозга

K12.1

Боль, покраснение, сыпь или налет слизистой рта.

Стоматит

E83.0

Симптомы начинаются в подростковом возрасте, после перенесенной желтухи.

Повторные кровотечения из носа, кровоточивость десен, кровоподтеки на коже, сосудистые “звездочки” на коже груди и спины. Нарушение менструального цикла у женщин.

Дрожание конечностей и всего туловища, напряжение мышц, непроизвольные движения конечностей, слюнотечение, нарушение речи, глотания, снижение интеллекта, перепады настроения.

Гепатолентикулярная дегенерация (болезнь Вильсона-Коновалова)

H81.0

Внезапные приступы головокружения, сочетающиеся с ухудшением слуха, шумом в ушах, повышенным выделением слюны, потливостью, тошнотой. Продолжительность приступа от нескольких минут до дней.

С годами слух снижается вплоть до полной глухоты. По мере снижения слуха, выраженность головокружений уменьшается.

Болезнь Меньера

L10.9

На коже всего тела образуются пузыри от 1 см и больше, полусферической форму с прозрачным содержимым, пузыри быстро вскрываются, оставляя ярко-розовые глянцевые эрозии.

При надавливании на пузырь он расползается. Возможны пузыри во рту, боль во рту, слюнотечение и специфический неприятный запах изо рта.

Пузырчатка

G70.9

Мышечная слабость возникает на фоне физической нагрузки и уменьшается после отдыха. Опущение век, затруднение жевания, глотания, гнусавость, слюноотделение, слабость мышц конечностей.

Поражение нервно-мышечного синапса

Миастения, ботулизм, отравление аминогликозидами

G80.9

Симптомы проявляются с детства.

Выраженная слабость мышц, больше ног, чем рук и лица. Деформация суставов и позвоночника. Нарушение слуха, зрения, речи, глотания, обильное слюнотечение, косоглазие, непроизвольные движения.

Детский церебральный паралич

F48.9

Беспокойство (тревога) — главное, но не всегда явное проявление заболевания.

Возникновение симптомов связано со стрессом, эмоциональным напряжением, неприятными жизненными событиями, трудностями или конфликтами (сам человек может отрицать наличие стрессового фактора).

Невротические и соматоформные расстройства

C06.9

Уплотнение на слизистой рта с медленным ростом, затем на месте уплотнения образуется язва с валикообразными краями.

Возможно увеличение лимфоузлов на шее.

Рак полости рта

C10.9

Боли и дискомфорт при глотании, чувство инородного тела в горле.

Возможно увеличение лимфоузлов на шее.

Рак ротоглотки

C08.9

Безболезненная плотная опухоль на шее.

Возможно увеличение лимфоузлов на шее, изменение кожи над опухолью (покраснение, мраморность, расширение подкожных вен или изъязвление).

Рак слюнной железы

C15.9

Слабость, похудение. Затруднение прохождения твердой, а затем жидкой пищи по пищеводу.

Возможны тошнота, рвота, изжога, неприятный запах изо рта, повышенное выделение слюны. Иногда боль за грудиной, в межлопаточной области, в шее.

Рак пищевода

C16.9

Сначала протекает бессимптомно, затем появляется тяжесть в области желудка, тошнота и рвота после еды, снижение аппетита, отрыжка, бледность, слабость, похудение.

Рак желудка

B08.8

Начало заболевания острое, с высокой температурой до 39—40°С, с ознобом, головными и мышечными болями.

К концу первых суток возникает жжение в полости рта, обильное слюнотечение, покраснение глаз, могут встречаться рези при мочеиспускании и легкая диарея. Затем на слизистой рта появляется покраснение и мелкие пузырьки, заполненные прозрачным, а затем мутным содержимым. Через 1—2 суток пузырьки вскрываются, а на их месте остаются эрозии, которые могут сливаться и образовывать обширные очаги изъязвления. Нарушение жевания, глотания и речи. Увеличение и болезненность лимфоузлов на шее. Продолжительность болезни составляет 5—7 дней.

Ящур

A82.9

Возникает через 1-3 месяца после укуса животного.

Жжение и зуд в области укуса, хотя к этому времени рана может полностью зарубцеваться. Слабое повышение температуры, головная боль, бессонница, потеря аппетита, необъяснимый страх и тревога. Через 1-3 дня развивается затруднение глотания, нарушение речи, сильная жажда, слюнотечение, потоотделение, водобоязнь. Резко повышенная чувствительность к малейшим раздражениям: яркий свет, различные звуки, шум вызывают судороги. Возбуждение, агрессивность, приступы буйства, галлюцинации, бред. Затем наступает паралич всех мышц и смерть (на 5-8 день заболевания).

Бешенство

T63.2

Возникает после укуса скорпиона.

Место укуса набухает, краснеет, чешется, болит. Беспокойство, гиперактивность, головные боли, тошнота, рвота, боли в области желудка и передней брюшной стенки, головокружение, спазмы отдельных групп мышц, судороги, нарушение координации движений, слюновыделение, выделения из носа, потливость. Отек языка, повышение температуры тела, тахикардия, потеря сознания.

Укус скорпиона

T63.4

Возникает после укуса паука.

Через 1-2 часа возникает ломота во всем теле (особенно в области живота, груди и поясницы), напряжение мышц брюшного пресса. Может наблюдаться одышка, тремор, учащение пульса, головная боль, тошнота, головокружение, потоотделение, слюнотечение, повышение давления.

Укус паука Каракурта (Средняя Азия, юг России)

T63.1

В месте укуса змеи возникает жжение, покраснение и отек. Через 15-30 мин развивается слабость (паралич) пораженной конечности, который распространяется вверх, захватывая мышцы туловища и лица. Двоение в глазах, нарушение глотания, опущение век и перекошенность лица. Онемение кожи, особенно в области укуса.

Укус кобры (Средняя Азия)

T56.9

Металлический привкус во рту, тошнота, рвота, боль при глотании, боль в животе, жидкий стул.

Через 3-4 сутки боль во рту, покраснение и изъязвление десен и щек, шаткость зубов.

Отравление тяжелыми металлами

T65.0

Симптомы развиваются в течении нескольких минут.

Ярко-розовая окраска кожи, слизистых оболочек губ и глаз, одышка, слабость. Запах горького миндаля изо рта, боль в горле, металлический привкус во рту, онемение языка. Может наступить смерть.

Отравление цианидами

T44.0

Влажная кожа, редкое сердцебиение, подергивания мышц, судороги, слюнотечение, кашель с мокротой, одышка, рвота, диарея, боль в животе, мышечная слабость, сужение зрачков.

Холинергический  синдром

Отравление лекарственными препаратами, грибами (бледная поганка, мухомор), некоторыми растениями, пестицидами.

Гиперсаливация: причины и лечение

Гиперсаливация, также известная как слюнотечение или слюнотечение, возникает, когда у человека во рту слишком много слюны. Это может привести к попаданию слюны изо рта на нижнюю губу, известному как слюнотечение.

В зависимости от причины гиперсаливация может быть постоянной или периодической. Он также может быть временным или хроническим. Нередко это может вызвать у человека социальную тревожность.

Гиперсаливация – это избыток слюны во рту, который может выливаться на губу.

Гиперсаливация — это не заболевание, а обычно симптом другого основного заболевания. Эти другие факторы могут варьироваться от легко поддающихся лечению и распространенных причин до редких заболеваний.

Слюна представляет собой прозрачную жидкость, вырабатываемую слюнными железами во рту. Смачивает пищу и облегчает глотание. Он также содержит ферменты, которые помогают пищеварению.

Слюна может способствовать заживлению ран и удалению микробов изо рта, а также предотвращает сухость и действует как барьер против раздражителей и токсинов.

В среднем у здорового человека ежедневно выделяется от 0,75 до 1,5 литров слюны. Выработка слюны достигает пика, когда человек ест, и минимальна во время сна.

Слишком много слюны может вызвать проблемы с разговором и едой, а также потрескавшиеся губы и кожные инфекции. Гиперсаливация и слюнотечение также могут вызывать социальную тревогу и снижение самооценки.

Существует много потенциальных причин гиперсаливации. Это может быть осложнение от ношения зубных протезов или плохой координации движений рта.

Гиперсаливация может быть результатом:

чрезмерного слюноотделения
неспособности эффективно проглатывать или откашливать слюну изо рта
трудности с закрытием рта

утренняя тошнота или тошнота во время беременности
инфекции носовых пазух, горла или перитонзиллярные инфекции
укусы ядовитых пауков, яд рептилий и ядовитые грибы 9
тяжелые инфекции, такие как бешенство или туберкулез
Затрудненное глотание или отхаркивание слюны изо рта может быть вызвано или связано с некоторыми основными состояниями, включая синдром Дауна, аутизм, боковой боковой амиотрофический склероз, инсульт и болезнь Паркинсона. Если у человека также есть сенсорная дисфункция, он может не всегда осознавать, что у него пускают слюни.
Причины неспособности держать рот закрытым, что может привести к слюнотечению, включают плохой нервно-мышечный контроль над мышцами вокруг рта. Церебральный паралич является примером такого состояния.
Затрудненное удержание слюны во рту также может быть вызвано:
- плохим контролем головы и губ
- постоянно открытым ртом
- нарушением тактильной чувствительности
- увеличенным языком или плохой подвижностью языка
- неправильным положением зубов
Гиперсаливация также может быть вызвана немедицинскими состояниями, такими как зрение, обоняние или вкус пищи, или даже просто мысли о еде. Это также может быть вызвано жеванием резинки или чувством волнения и беспокойства.
Симптомы гиперсаливации включают слюнотечение, срыгивание и чрезмерное глотание.
Другие сопутствующие симптомы включают:
- потрескавшиеся губы
- размягчение и повреждение кожи вокруг рта
- инфекция кожи вокруг рта
- неприятный запах изо рта
- обезвоживание
- нарушение речи
- пневмония
- нарушение вкуса или говорить.
  Люди с гиперсаливацией чаще вдыхают слюну, пищу или жидкости в легкие, что может привести к аспирационной пневмонии. Это может произойти при нарушении рвотного и кашлевого рефлексов.
  Целью диагностики гиперсаливации является точное определение основной причины, а затем рекомендации наилучшего доступного лечения для каждого пострадавшего. Диагноз важен, так как некоторые из потенциальных причин гиперсаливации имеют серьезные осложнения.
  Для диагностики гиперсаливации врач может включить следующие исследования:
  - рот, зубы и окружающую кожу
  - контроль языка, способность глотать и стабильность челюсти
  - миндалины и носовые дыхательные пути
  - настороженность и эмоциональное состояние
  - обезвоживание, чувство голода и положение головы
  Врач обычно считает необходимым оценить другие критерии, включая: возникает гиперсаливация
- количество выделяемой дополнительной слюны
- независимо от того, является ли проблема постоянной или периодической
- любое неблагоприятное воздействие на повседневную жизнь
После установления причины гиперсаливации врач может принять во внимание следующие факторы, рекомендуя лечение:
- тяжесть и осложнения
- возраст и психическое состояние
- является ли гиперсаливация хронической или временной
- сопутствующие неврологические состояния
- возможность улучшения
Логопедия и методы улучшения контроля над языком и губами могут помочь в лечении гиперсаливации.
Лечение гиперсаливации заключается в лечении основного заболевания, вызвавшего ее, а также в лечении непосредственных последствий избыточного слюноотделения во рту.
В зависимости от причины лечение может включать определенные виды терапии, лекарства и домашние средства. В крайних случаях может быть рассмотрено хирургическое вмешательство.
Терапия : Это может включать модификацию поведения и логопедическую терапию. Людям, испытывающим гиперсаливацию, может помочь помощь с осанкой и контролем головы. Они также могут научиться техникам закрывания губ, лучшего контроля над языком и глотания.
Лекарство : Целью лечения гиперсаливации является снижение выработки шалфея. Можно использовать антихолинергические препараты, хотя они имеют ряд побочных эффектов, включая сонливость, беспокойство, раздражительность, задержку мочи, запор и приливы. Лечение также может включать бета-блокаторы или ботулинический токсин (ботокс).
Домашние средства : Обильное питье может снизить выработку слюны. Чистка зубов и полоскание рта жидкостью для полоскания рта также могут временно высушить полость рта.
Успешное лечение гиперсаливации и, как следствие, слюнотечения может повысить уверенность человека и его самооценку.
Некоторые причины гиперсаливации могут исчезнуть со временем без лечения. К таким причинам относятся беременность, тревога и незначительные травмы.
Другие причины могут представлять более серьезные медицинские проблемы. В эту категорию входят неврологические причины и нервные расстройства.
Если причиной являются хронические состояния, лечение может включать в себя пожизненное лечение гиперсаливации человека.
Прочтите статью на испанском языке.
Секрет нашей слюны: пища и микробы помогли людям эволюционировать в уникальных представителей высших приматов. Доказательства находятся в нашей слюне, согласно новому исследованию Университета в Буффало.
Исследование показало, что человеческая диета — результат повышенного потребления мяса, кулинарии и сельского хозяйства — привела к резким различиям в слюне людей по сравнению со слюной других приматов.
Человеческая слюна уникальна тем, что она более водянистая и содержит другую смесь белков. Выводы стали большим сюрпризом для исследователей, поскольку известно, что люди являются генетически близкими родственниками человекообразных обезьян, шимпанзе и горилл.
«Слюнные белки у людей и других приматов могут быть упущены из виду очагами эволюционной активности», — сказал Стефан Рул, доктор медицинских наук, доктор философии, ведущий исследователь и профессор биологии полости рта в Школе стоматологической медицины Университета Нью-Йорка. «Мы уже знали, что эволюционная адаптация к специфической для человека диете привела к очевидным изменениям челюстей и зубов, а также микробиома полости рта. Наши результаты теперь открывают возможность того, что различия в питании и патогенное давление могли также сформировать особую слюну у людей».
Исследование опубликовано вчера вечером, 15 октября, в журнале «Молекулярная биология и эволюция».
За пределами плевка
Слюна является важным секретом человеческого организма. Жидкость помогает переваривать пищу, защищает зубную эмаль, удерживает микробы во рту и формирует первую линию защиты от патогенов. Слюна также играет важную роль в речи и вкусе.
Многие функции слюны можно отнести к протеому слюны, который представляет собой тысячи белков в жидкости. Эти белки могут также пролить свет на то, как человечество отличалось от человекообразных обезьян на протяжении всей своей эволюции.
Исследователи сравнили белки слюны человека и наших ближайших эволюционных родственников: горилл и шимпанзе. Также были исследованы макаки, имеющие общего, более отдаленного предка с людьми и человекообразными обезьянами.
На рисунке показаны различия между белками в слюне человека, шимпанзе и гориллы с использованием трех различных методов окрашивания. Фото: Штефан Рул.
Ключевые результаты включают:
- У людей более водянистая слюна, чем у человекообразных обезьян. Общее содержание белка в слюне человека было менее чем вдвое меньше, чем в слюне шимпанзе, гориллы и макаки.
- Человеческая слюна лучше расщепляет крахмал, модифицирует жир и определяет ключевые вкусы в рационе человека. Исследователи обнаружили у людей большее количество амилазы (фермент, ключевой для переваривания крахмала в сахара) и карбоангидразы VI (фермент, участвующий в восприятии вкуса), чем у человекообразных обезьян. Слюна людей и шимпанзе также содержала больше цинк-альфа-2-гликопротеина, белка, который способствует жировому обмену, чем слюна горилл.
- Потеря нашего меха привела к отсутствию латерина в человеческой слюне. Латерин, похожий на детергент белок, который помогает жидкостям становиться пенистыми, был обнаружен только в слюне человекообразных обезьян. Исследователи считают, что люди, которые больше не выращивают шубы и не занимаются уходом за собой, потеряли потребность в производстве белка.
- Все основные белки, обнаруженные в слюне человека, также присутствовали в слюне шимпанзе и гориллы. Набор белков, обнаруживаемых в слюне человека, соответствует таковому у человекообразных обезьян. Однако были обнаружены резкие различия в количестве и структуре белка. «Последнее может быть частично связано с различными гликанами — сложными молекулами сахара — прикрепленными к белкам», — говорит Рул.
«Эволюционировали ли слюнные железы человека, чтобы производить более водянистую слюну, чтобы приспособиться к диете, которая резко отличается от диеты человекообразных обезьян?» — спрашивает Супапорн «Нина» Тамадилок, доктор философии, кандидат фармацевтических наук в Массачусетском колледже фармации и медицинских наук и бывший постдокторский научный сотрудник в лаборатории Рула. «Великие приматы и обезьяны Старого Света пережевывают богатую клетчаткой пищу в течение более длительных периодов времени, в то время как люди глотают пищу быстрее, и эта способность, возможно, поддерживается приготовлением пищи. Водянистая консистенция слюны может способствовать более быстрому перевариванию сухой пищи во рту и облегчению глотания.
«В засушливой среде, похожей на саванну, где эволюционировали ранние люди, также может быть полезно поддерживать влажность рта, или это может быть важно для облегчения человеческой речи и вокализации. Конечно, эти возможности остаются спекулятивными».
Соавтор исследования Омер Гоккумен добавил: «Результаты исследования обеспечивают необходимую основу для будущих исследований, чтобы оценить, были ли различия в белках слюны человека вызваны естественным отбором».
«Задача будет состоять в том, чтобы расшифровать генетические основы этих изменений и понять эволюционные механизмы, которые их вызвали. Для некоторых генов у нас есть хорошая идея, однако для большинства других нам еще предстоит выяснить», — сказал Гоккумен, доктор философии, доцент биологических наук в Колледже искусств и наук Университета Нью-Йорка 9.0003
Различия, вызванные болезнью
Различия между слюной человека и человекообразных обезьян также были обнаружены в белках, участвующих в защите от болезней.
Слюна шимпанзе, горилл и макак содержала большее количество секреторного белка околоушной железы, чем слюна человека. Слюна человека и шимпанзе содержала более высокие уровни секреторных компонентов иммуноглобулина, чем слюна гориллы. Каждый из белков играет роль в защите от болезней.
«Помимо диеты, патогенное давление является еще одной важной движущей силой эволюционной адаптации», — сказал Рул. «Был ли какой-либо из белков слюны, которые демонстрируют характерные для человека черты, изменены болезнями, которые возникли вместе с эволюцией человека в главного хищника и последующим переходом к сельскому хозяйству и разведению домашнего скота, — интригующий вопрос, который стоит изучить.
«Мало что известно о степени, в которой человеческая слюна адаптировалась к диетическим, технологическим (измельчение, резка и приготовление пищи), окружающей среде и микробным воздействиям. Надеемся, что другие лаборатории присоединятся к нам со своим опытом и помогут нам ответить на эти фундаментальные вопросы».
Об исследовании
Дополнительные исследователи включают Кёнг-Су Чой, младшего консультанта-биолога в Eli Lilly and Company и бывшего технолога-исследователя в Комплексном онкологическом центре Розуэлл-Парк; Лоренц Рул, старший научный сотрудник Putnam Associates и бывший летний студент-исследователь в Комплексном онкологическом центре Розуэлл-Парк; Латиф Казим, доктор философии, почетный преподаватель Комплексного онкологического центра Розуэлл-Парк; и Фабиан Шульте, доктор философии, научный сотрудник, и Маркус Хардт, доктор философии, помощник сотрудника, оба в Институте Форсайта.
Исследование проводилось при поддержке Национального института стоматологических и черепно-лицевых исследований и Национального института рака, как в рамках Национальных институтов здравоохранения, так и Комплексного онкологического центра Розуэлл-Парк.
Экзосомы человеческой слюны, плазмы и грудного молока содержат РНК: поглощение макрофагами | Журнал трансляционной медицины
- Исследования
- Открытый доступ
- Опубликовано: 14 января 2011 г.
- Cecilia Lässer ¹ ,
- Vesta Seyed Alikhani ¹ ,
- Karin Ekström ¹ ,
- Maria Eldh ¹ ,
- Patricia Torregrosa Paredes ² ,
- Apostolos Bossios ¹ ,
- Маргарета Шёстранд ¹ ,
- Сюзанна Габриэльссон ² ,
- Ян Лётвалл ¹ и
- …
- Хади Валади ³
Журнал трансляционной медицины том 9 , номер статьи: 9 (2011) Процитировать эту статью
- 31 тыс. обращений
- 583 Цитаты
- 42 Альтметрический
- Сведения о показателях
Abstract
Background
Экзосомы представляют собой мембранные везикулы размером 30-100 нм эндоцитарного происхождения, продуцируемые многочисленными клетками. Они могут опосредовать различные биологические функции, включая презентацию антигена. Недавно было показано, что экзосомы содержат функциональную РНК, которая может быть доставлена в другие клетки. Таким образом, экзосомы могут опосредовать биологические функции либо за счет взаимодействий поверхность-поверхность с клетками, либо за счет доставки функциональной РНК в клетки. Поэтому нашей целью было определить наличие РНК в экзосомах человеческой слюны, плазмы и грудного молока, а также определить, могут ли эти экзосомы поглощаться макрофагами.
Метод
Экзосомы очищали из человеческой слюны, плазмы и грудного молока с использованием стадий ультрацентрифугирования и фильтрации. Экзосомы выявляли с помощью электронной микроскопии и исследовали с помощью проточной цитометрии. Проточную цитометрию выполняли путем захвата экзосом на шариках, покрытых анти-MHC класса II, и дальнейшего окрашивания анти-CD9, анти-CD63 или анти-CD81. Экзосомы грудного молока дополнительно анализировали на наличие Hsc70, CD81 и калнексина с помощью вестерн-блоттинга. Тотальную РНК определяли с помощью биоанализатора, а мРНК идентифицировали путем синтеза кДНК с использованием олиго (dT) праймера и анализировали с помощью биоанализатора. Поглощение PKH67-меченых экзосом слюны и грудного молока макрофагами исследовали путем измерения флуоресценции с использованием проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии.
Результаты
РНК была обнаружена в экзосомах всех трех жидкостей организма. Часть обнаруженной РНК в экзосомах плазмы была охарактеризована как мРНК. Наш результат расширяет характеристику экзосом у здоровых людей и подтверждает присутствие РНК в экзосомах слюны и плазмы человека, а также впервые сообщает о присутствии РНК в экзосомах грудного молока. Наши результаты также показывают, что экзосомы слюны и грудного молока могут поглощаться макрофагами человека.
Выводы
Экзосомы в слюне, плазме и грудном молоке содержат РНК, что подтверждает предыдущие выводы о том, что экзосомы из нескольких источников содержат РНК. Кроме того, экзосомы легко поглощаются макрофагами, что подтверждает представление о том, что экзосомальная РНК может перемещаться между клетками.
История вопроса
Экзосомы представляют собой небольшие мембранные везикулы (30-100 нм) эндоцитарного происхождения, которые высвобождаются из клетки-продуцента во внеклеточную среду [1]. Многие клетки в организме обладают способностью продуцировать экзосомы и выделять их в окружающую среду, включая дендритные клетки, В-клетки, Т-клетки, тучные клетки, опухолевые клетки и эпителиальные клетки [2–7]. Экзосомы также присутствуют в жидкостях организма, включая плазму, мочу, слюну, злокачественные выпоты, синовиальную жидкость, грудное молоко, жидкость бронхоальвеолярного лаважа и эпидидимальную жидкость [8-15], что указывает на важность in vivo . До сих пор экзосомы были вовлечены в первую очередь в презентацию антигена, поскольку они часто экспрессируют несколько белков, участвующих в клеточной адгезии и ко-стимуляции, включая ICAM-1, CD86, CD63 и CD82, MHC класса I и MHC класса II [1]. Эти иммунологические функции привели к разработке противоопухолевых вакцин на основе экзосом, которые в настоящее время находятся на ранней стадии клинической разработки [16, 17].
Предполагается, что экзосомы передают сигнал путем связывания с рецепторами клеточной поверхности через молекулы адгезии [3] и путем слияния или интернализации реципиентной клеткой, потенциально жертвуя свою собственную цитоплазму реципиентной клетке [18, 19]. Последнее подразумевает, что экзосомы могут иметь механизмы, отличные от их функции в иммунной системе. Недавно мы обнаружили значительные количества РНК в экзосомах, полученных из тучных клеток [20], которые обладают способностью передавать свою РНК другим клеткам и впоследствии могут влиять на продукцию белка реципиентной клеткой. Это свидетельствует о том, что РНК может переноситься между клетками млекопитающих с помощью механизма транспорта на основе внеклеточных экзосом, который имеет огромное значение для понимания клеточной коммуникации, регуляции и передачи сигналов, в дополнение к обширному терапевтическому потенциалу при многих заболеваниях. Таким образом, исследования по определению наличия РНК в экзосомах, полученных от человека in vivo имеют высокий приоритет.
Поскольку человеческая плазма, слюна и грудное молоко содержат экзосомы [8, 12, 15], целью настоящего исследования было определить, содержат ли эти экзосомы РНК и могут ли они быть поглощены другими клетками, которые могли бы поддерживать концепция, что шаттл РНК может происходить в организме человека.
Методы
Очистка экзосом из слюны
Слюну здоровых людей собирали в пробирки Falcon на льду в течение периода без еды и питья и объединяли. Для эксперимента по выделению РНК добавляли 100 мкл ингибитора протеазы Complete Mini (Roche Diagnostics Scandinavia AB, Бромма, Швеция) и 800 единиц ингибитора РНКазы RiboLock Ribonuclease Inhibitor (Fermentas, Санкт-Леон-Рот, Германия) на 20 мл раствора. слюна. Для проточной цитометрии, электронной микроскопии и экспериментов по поглощению в пробирки не добавляли ингибиторы. Слюну разбавляли 1:1 фосфатно-солевым буфером (PBS) и центрифугировали при 16 500 × g в течение 20 мин для удаления клеток и дебриса. Супернатант фильтровали через 0,2 мкм VWR 9.0269® Система вакуумной фильтрации (VWR International, Западный Честер, Пенсильвания, США) перед ультрацентрифугированием (ротор Ti70 или Ti45, Beckman Coulter, Бреа, Калифорния, США) при 120 000 × g в течение 70 мин для осаждения экзосом.
Очистка экзосом из плазмы крови
У доноров забирали кровь в объеме 450-500 мл. Плазму получали из гепаринизированной крови центрифугированием при 1800×g в течение 10 мин. Дальнейшее центрифугирование при 29 500 × g в течение 20 минут было выполнено для осаждения любых оставшихся клеток и дебриса. Затем супернатант фильтровали через 0,2 мкм VWR 9.Система вакуумной фильтрации 0269 ® с последующим ультрацентрифугированием при 120 000 g в течение 90 мин для осаждения экзосом.
Очистка экзосом из грудного молока
Человеческое грудное молоко собирали у здоровых матерей, немедленно хранили при -20ºC, а затем передавали в лабораторию и хранили при -80 ºC. Для удаления клеток и мусора грудное молоко сначала центрифугировали при 300×g в течение 10 минут, а затем центрифугировали при 16 500×g в течение 20 минут. Затем супернатант фильтровали через 0,2 мкм VWR 9.Система вакуумной фильтрации 0269® с последующим ультрацентрифугированием при 120 000 g в течение 70 мин для осаждения экзосом.
Электронная микроскопия
Экзосомы из слюны, плазмы и грудного молока выделяли, как описано выше, промывали в PBS для дальнейшей очистки образца, фильтровали и снова подвергали ультрацентрифугированию при 120 000 × g в течение 70 минут для повторного осаждения экзосом. Осадок экзосомы ресуспендировали в PBS и наносили на сетки, покрытые формваром, покрытые углеродом (Ted Pella Inc, Реддинг, США). Далее экзосомы фиксировали в 2% параформальдегиде и промывали. Экзосомы подвергали иммуноокрашиванию антителом против CD63 (BD Bioscience, Erembodegem, Бельгия) или изотипическим контролем (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) с последующим окрашиванием вторичным антителом, меченным золотом размером 10 нм (Sigma-Aldrich). . Затем экзосомы фиксировали в 2,5% глутаральдегиде, промывали, контрастировали 2% уранилацетатом и заключали в смесь уранилацетата (0,8%) и метилцеллюлозы (0,13%). Препараты исследовали на LEO 9.Электронный микроскоп 12AB Omega (Carl Zeiss NTS, Йена, Германия).
Проточная цитометрия экзосом
Изолированные экзосомы слюны, плазмы или грудного молока ресуспендировали в PBS и наносили на шарики, покрытые анти-MHC класса II (изготовленные на заказ компанией Dynal, частью Invitrogen Ltd, Пейсли, Великобритания). Гранулы, покрытые анти-MHC класса II (8 × 10 ⁴ ), смешивали с минимум 50 мкг экзосомального белка перед инкубацией в течение ночи при 4°C при осторожном перемешивании. Комплексы шарик-экзосома дважды промывали в PBS с 3% фетальной бычьей сывороткой (FBS). Перед использованием FBS подвергали ультрацентрифугированию при 120 000 g в течение 1,5 часов для удаления экзосом сыворотки. Комплексы шарик-экзосома ресуспендировали в IgG (Sigma-Aldrich) и инкубировали в течение 15 минут при комнатной температуре, после чего еще дважды промывали, как описано выше. Тетраспанины CD9, CD63 и CD81, о которых известно, что они обогащены экзосомами, использовали в качестве маркеров экзосом. Комплексы шарик-экзосома инкубировали с PE-мечеными анти-CD9 (клон M-L13), анти-CD63 (клон H5C6), анти-CD81 (клон JS-81) или соответствующим изотипическим контролем (все антитела были от BD Biosciences). ) в течение 40 мин при комнатной температуре при перемешивании и трижды промывали перед анализом. В качестве контроля неспецифического связывания антител с шариками шарики окрашивали всеми тремя антителами без добавления экзосом, и не было выявлено различий по сравнению с шариками, покрытыми экзосомами, окрашенными изотипическим контролем. Затем образцы были получены в FACScan или FACSAria (BD Biosciences) и проанализированы с использованием программного обеспечения FlowJo (Tri Star Inc, Ashland, OR, USA).
Вестерн-блот-анализ экзосомальных белков грудного молока
Выделенные экзосомы грудного молока ресуспендировали в PBS и ультрацентрифугировали при 120 000 × g в течение 70 минут для повторного осаждения перед растворением в реагенте для лизиса клеток млекопитающих ProteoJET (Fermentas). Для выделения общего белка образец инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут на шейкере, обрабатывали ультразвуком в течение 5 минут и встряхивали, а затем центрифугировали при 13 000 × g в течение 10 минут. Содержание белка в супернатанте измеряли спектрофотометром при 750 нм с использованием D _c Реагент для анализа белка A и B (Bio-Rad Laboratories, Геркулес, Калифорния, США). 100 мкг белков из супернатанта наносили на лунку на 10%-ный акриламидный гель. Макрофаги, полученные из моноцитов из лейкоцитарной пленки, использовали в качестве контроля. Белки наносили на нитроцеллюлозную мембрану (Bio-Rad Laboratories) в течение ночи при 4°С. Мембрану блокировали 0,5%-ным обезжиренным сухим молоком Blotting Grade Blocker (Bio-Rad Laboratories) в TBS в течение 2 часов, а затем промывали 3 раза по 5 минут в TBS-Tween (использовали для всех промывок на протяжении всего эксперимента по Вестерн-блоттингу). Затем мембрану инкубировали либо с анти-кальнексином (1:1000) (Santa Cruz Biotechnology, Санта-Круз, Калифорния, США), либо с анти-Hsc70 (1:1000) (Enzo Life Science, Farmingdale, NY, USA), либо с анти- CD81 (1:800) (Santa Cruz), разведенный в 0,25% обезжиренном сухом молоке в TBS-Tween на 2 часа. Мембрану промывали 3 раза по 5 минут перед инкубацией со вторичным антителом в течение 2 часов. В качестве вторичных антител использовали козий F(ab) 9.0398 2 анти-кроличьи IgG (конъюгированные с пероксидазой хрена) для калнексина и CD81 (1:5000) (Harlan Sera-Lab, Лафборо, Великобритания) и F(ab) кролика Hsc70 (1:4000) (Southern Biotech, Бирмингем, Алабама, США), разведенный в 0,25% обезжиренного сухого молока в TBS-Tween. Мембрану промывали 3 раза по 5 минут перед анализом с помощью системы детекции вестерн-блоттинга Amersham™ ECL Plus™ (GE Healthcare, Уппсала, Швеция) и VersaDoc 4000 MP (Bio-Rad Laboratories).
Выделение и обнаружение РНК
РНК выделяли с использованием Trizol ^® (Invitrogen) в соответствии с протоколом производителя и растворяли в DEPC H ₂ O (Fermentas). Для обнаружения РНК для всех образцов использовали биоанализатор Agilent 2100 (Agilent Technologies Sweden AB, Киста, Швеция). Экзосомальную РНК сравнивали с клеточной РНК линии тучных клеток человека HMC-1. Клетки HMC-1 (д-р Дж. Баттерфилд, клиника Майо, Рочестер, Миннесота, США) культивировали во влажном инкубаторе при 37ºC с 5% CO 9 .0398 2 , в полной среде, состоящей из модифицированной среды Дульбекко Искова (IMDM) с добавлением 10% FBS, 100 единиц/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ L-глутамина и 1,2 мМ/мл альфа-тиоглицерина (все реагенты от Сигма-Олдрич).
Для обнаружения мРНК в экзосомах выделенная общая РНК была преобразована в кДНК с использованием набора для синтеза кДНК RevertAid™ H Minus First Strand (Fermentas) и олиго (dT) праймера. Вторую цепь кДНК синтезировали добавлением 10 мкл реакционного буфера 10×ДНК-полимеразы 1, 4 мкл ДНК-полимеразы 1, 5 мкл ДНК-лигазы Т4 и 61 мкл воды DEPC (все реагенты были от Fermentas) к первой цепь продукта кДНК. Образец инкубировали при 14°С в течение 2 ч, после чего реакцию останавливали инкубацией при 70°С в течение 10 мин. Обнаружение кДНК проводили с помощью биоанализатора.
Окрашивание экзосом
Экзосомы слюны и грудного молока выделяли, как описано выше, и дополнительно очищали растворением в PBS и ультрацентрифугированием при 120 000 × g в течение 70 мин. Экзосомы метили с помощью набора Green Fluorescent Cell Linker PKH67 для общего мечения клеточных мембран (Sigma-Aldrich) в соответствии с протоколом производителя с небольшими изменениями в процессе промывки. Вкратце, экзосомы разводили в PBS перед добавлением 1 мл Diluent C. В качестве контроля использовали 1 мл Diluent C с таким же объемом PBS. 4 мкл красителя PKH67 добавляли к 1 мл Diluent C перед добавлением к экзосомам и контролю. Образцы осторожно перемешивали в течение 4 минут, после чего добавляли 2 мл 1% BSA для связывания избытка красителя. Затем образцы переносили на фильтры Vivaspin 300 кДа (Sartorius Stedim Biotech GmbH, Геттинген, Германия) и центрифугировали при 4000 g. Образец промывали 3 раза 5 мл PBS перед переносом на новые фильтры Vivaspin 300 кДа и дважды промывали 5 мл IMDM (Sigma-Aldrich).
Поглощение экзосом слюны и грудного молока макрофагами
Периферические мононуклеарные клетки (МКПК) выделяли из лейкоцитарной пленки с использованием пробирок Leucosep ^® (Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany) в соответствии с протоколом производителя. PBMC неоднократно промывали 2 мМ ЭДТА в PBS перед растворением в 0,5% BSA и 2 мМ EDTA в PBS. Моноциты выделяли из РВМС с использованием набора для выделения моноцитов II (Miltenyi Biotec Gmbh, Бергиш-Глагбах, Германия) в соответствии с протоколом производителя. Чистоту моноцитов определяли с помощью FACSAria по обнаружению CD14 (клон MΦP9, BD Biosciences). Для дифференциации в макрофаги моноциты культивировали в течение 7 дней во влажном инкубаторе при 37ºC с 5% CO ₂ в полной среде, состоящей из IMDM с добавлением 10% FBS, 100 единиц/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина. , 2 мМ L-глутамина, 110 мкг/мл пирувата натрия (все реагенты были от Sigma-Aldrich) и 10 нг/мл GM-CSF (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, США). Перед использованием FBS подвергали ультрацентрифугированию для удаления экзосом сыворотки. Для анализа методом проточной цитометрии клетки культивировали в 96-луночные планшеты и для флуоресцентной микроскопии клетки культивировали в 8-луночных предметных стеклах Permanox (Thermo Fisher Scientific, Нью-Йорк, США).
10 мкг меченных PKH67 экзосом или такой же объем контроля PKH67-PBS добавляли на 200 000 макрофагов и инкубировали в течение 2 ч при 37°C или 4°C. Связывание экзосом с макрофагами анализировали с помощью FACSAria и визуализировали с помощью флуоресцентного микроскопа (Zeiss Axioplan 2, Carl Zeiss, Йена, Германия). Для анализа с помощью проточной цитометрии клетки дважды промывали PBS, обрабатывали 0,25% раствором трипсин-ЭДТА (Sigma-Aldrich) и дважды промывали 1% FBS в PBS перед получением в FACSAria и анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo. Для флуоресцентной микроскопии клетки дважды промывали PBS, фиксировали 4% формальдегидом в течение 15 минут и дважды промывали PBS, а затем помещали в Vectashield (Vector Laboratories Inc., Берлингейм, США) с 3% 7-ADD (BD Biosciences). маркировать ядра.
Результаты
Слюна, плазма и грудное молоко человека содержат экзосомы
Экзосомы из слюны, плазмы и грудного молока были идентифицированы с помощью электронной микроскопии (рис. 1A-D), а экзосомы из всех источников были положительными на CD63 при окрашивании иммунозолотом (рис. 1Б-Г). Кроме того, проточная цитометрия экзосом слюны, плазмы и грудного молока, захваченных гранулами, покрытыми анти-MHC класса II, выявила присутствие CD9, CD63 и CD81 на экзосомах из всех трех источников (рис. 2). Экзосомы грудного молока были дополнительно охарактеризованы Вестерн-блоттингом, и было показано, что они положительны в отношении Hsc70 и CD81, но отрицательны в отношении маркера эндоплазматического ретикулума калнексина (рис. 3).
Рисунок 1
Экзосомы из слюны, плазмы и грудного молока, обнаруженные с помощью электронной микроскопии. Экзосомы из человеческой слюны (А, В), плазмы (С) и грудного молока (D) исследовали в электронном микроскопе. Антитело для контроля изотипа (A), но антитело к CD63 (B-D) было обнаружено вторичным антителом, меченным золотом размером 10 нм. Масштабные полосы представляют 100 нм.
Изображение в полный размер
Рисунок 2
Проточная цитометрия для обнаружения поверхностных молекул на экзосомах слюны, плазмы и грудного молока. Экзосомы из слюны, плазмы и грудного молока, захваченные на гранулах анти-MHC класса II, окрашивали с помощью иммуноокрашивания с использованием моноклональных антител против тетраспанинов CD9, CD63 и CD81 и анализировали с помощью проточной цитометрии. Антитела (незаштрихованные пики) сравнивали с их соответствующими изотипическими контролями (закрашенные пики).
Изображение в полный размер
Рисунок 3
Характеристика экзосом грудного молока с помощью вестерн-блоттинга. Экзосомальные белки из экзосом грудного молока загружали на 10% акриламидный гель и переносили на нитроцеллюлозную мембрану. Экзосомы грудного молока положительны по Hsc70 и CD81, но отрицательны по белку эндоплазматического ретикулума, калнексину. Белок макрофагов («клетки») использовали в качестве положительного контроля.
Изображение в полный размер
Экзосомы человека содержат РНК
Содержание РНК в экзосомах слюны, плазмы и грудного молока было проанализировано с использованием прибора Bioanalyzer, который показал, что все три типа экзосом содержат РНК с небольшим количеством рибосомной РНК или без нее ( 18S- и 28S-рРНК) (рис. 4). Структура экзосомальной РНК, визуализируемая в биоанализаторе, существенно отличалась от клеточной РНК HMC-1, которая содержит значительное количество рибосомной РНК (рис. 4).
Рисунок 4
Анализ экзосомальной РНК с использованием биоанализатора. Общая РНК была выделена из экзосом слюны, плазмы и грудного молока с использованием Trizol ^® и проанализирована с помощью биоанализатора. Результаты показывают, что экзосомы из человеческой слюны, плазмы и грудного молока содержат разное содержание РНК по сравнению с клеточной РНК из клеток HMC-1, поскольку экзосомы содержат мало рибосомной РНК или совсем не содержат ее.
Изображение полного размера
Мы также подтвердили наличие полиаденилированной РНК в экзосомах из плазмы путем синтеза кДНК с использованием олиго (dT) праймера (рис. 5). Однако кДНК нельзя было синтезировать из экзосомальной РНК, выделенной из слюны или грудного молока, с использованием того же метода (данные не показаны).
Рисунок 5
Обнаружение мРНК в экзосомах плазмы с помощью биоанализатора. Экзосомальную РНК транскрибировали в кДНК с использованием олиго (dT) праймера. Результаты показывают, что часть РНК в экзосомах плазмы представляет собой мРНК. Стрелки показывают пики для нижнего и верхнего маркеров. Пики между этими маркерами указывают на присутствие кДНК, синтезированной из экзосомальной РНК плазмы.
Изображение в натуральную величину
Макрофаги человека захватывают экзосомы человеческой слюны и грудного молока
Чтобы выяснить, могут ли экзосомы из жидкостей организма человека поглощаться клетками-реципиентами, экзосомы человеческой слюны и грудного молока были помечены красителем PKH67 (зеленый) и добавлены к культурам макрофагов человека, полученных из моноцитов лейкоцитарной пленки (чистота >94% ). Проточная цитометрия показала поглощение экзосом макрофагами, о чем свидетельствует увеличение средней интенсивности флуоресценции (MFI) для PKH67 по сравнению с макрофагами, культивируемыми с контролем PBS или культивируемыми с экзосомами при 4°C (рис. 6A-B). Поглощение флуоресцентных экзосом макрофагами также визуализировали с помощью флуоресцентной микроскопии (рис. 6C-D).
Рисунок 6
Поглощение экзосом слюны и грудного молока макрофагами человека. 10 мкг экзосом слюны, меченных PKH67, экзосом грудного молока, меченных PKH67, или контроля PKH67-PBS добавляли на 200 000 макрофагов и инкубировали при 37ºC или 4ºC в течение 2 часов. Поглощение флуоресцентно меченных экзосом слюны и грудного молока макрофагами было обнаружено как с помощью проточной цитометрии (A и B соответственно), так и с помощью флуоресцентной микроскопии (C и D соответственно). Поглощение уменьшалось при 4ºC, что указывает на биологически активное поглощение. На снимках флуоресцентной микроскопии (C и D) 7-AAD использовали для обнаружения ядра макрофагов (красный цвет), а PKH67 использовали для маркировки экзосом (зеленый цвет). Данные MFI представлены как среднее ± SEM для экзосом слюны n = 3 и для экзосом грудного молока n = 4.
Увеличенное изображение
Обсуждение
Это исследование подтверждает наличие экзосом в человеческой слюне, плазме и грудном молоке, показанное с помощью электронной микроскопии и проточной цитометрии. Мы демонстрируем, что экзосомы из всех трех биологических источников содержат значительное количество преимущественно короткой РНК, часть которой идентифицируется как мРНК в экзосомах плазмы. Исследование также показывает поглощение экзосом слюны и грудного молока макрофагами.
Электронная микроскопия показала, что везикулы, выделенные из слюны, плазмы и грудного молока, имеют диаметр 50-80 нм, что сравнимо с идентифицированными ранее экзосомами [2-4]. Кроме того, окрашивание иммунозолотом показало, что экзосомы были положительными по тетраспанину CD63, обычно используемому маркеру экзосом. Анализ проточной цитометрии также косвенно показал наличие MHC класса II в слюне, плазме и везикулах, полученных из грудного молока, а также присутствие CD9., CD63 и CD81. Хотя мы признаем, что вирусы размером менее 200 нм могут составлять небольшую часть препарата экзосом, ЭМ-анализ и обнаружение нескольких экзосомальных белков убедительно свидетельствует о том, что идентифицированные везикулы являются экзосомами, а не другими наночастицами.
Настоящее исследование подтверждает наш первоначальный вывод о том, что экзосомы содержат РНК [20], уточняя, что экзосомы в различных жидкостях организма здоровых людей также содержат РНК. Недавно сообщалось, что экзосомы из плазмы и слюны человека содержат РНК [21–23], что еще раз подтверждает этот вывод. В этом исследовании впервые сообщается о присутствии РНК в экзосомах грудного молока человека, что означает, что экзосомы могут доставлять РНК из клеток матери в клетки потомства.
Многие компартменты клетки, кроме мультивезикулярных телец, могут выделять везикулы. Поскольку обнаружение РНК-содержащих экзосом в грудном молоке является новым, мы подтвердили, что это действительно экзосомы, продемонстрировав присутствие Hsc70 и CD81 и отсутствие белка эндоплазматического ретикулума, калнексина. Поскольку кальнексин не был обнаружен, это указывает на то, что контаминация везикулами, происходящими из эндоплазматического ретикулума, в экзосомах, происходящих из грудного молока, незначительна или отсутствует. Кроме того, ранее было показано, что экзосомы грудного молока содержат Hsc70 и CD81 [12], обнаружение этих молекул с помощью вестерн-блоттинга на экзосомах, полученных из грудного молока, выделенных в этом исследовании, послужило дальнейшему подтверждению их идентификации в качестве экзосом. Таким образом, мы делаем вывод, что РНК-содержащие везикулы, обнаруженные в грудном молоке, являются экзосомами. Мы также подтвердили наши выводы, обнаружив РНК-содержащие экзосомы в грудном молоке от шести разных доноров.
Экзосомы слюны и грудного молока могут поглощаться макрофагами человека, о чем свидетельствует поглощение флуоресцентно окрашенных экзосом. Было показано, что другие клетки могут поглощать экзосомы аналогично макрофагам [24, 25], что указывает на то, что это общая черта экзосом. Активное поглощение экзосом, полученных из жидкости организма, клетками-реципиентами указывает на значимость переноса экзосом. Недавно было показано, что кислые условия увеличивают поглощение опухолевых экзосом [19]. ]. Это может быть важно, поскольку экзосомы слюны могут поглощаться клетками в кислой среде желудочно-кишечного тракта.
Присутствие РНК в экзосомах из трех различных исследованных жидкостей организма человека вызывает предположения о ее важности в биологии человека. Поскольку экзосомы могут перемещать РНК между клетками, вполне разумно предположить, что экзосомы в плазме могут быть вектором для генетической коммуникации между клетками в разных органах и что экзосомы в грудном молоке могут быть важным вектором для коммуникации между матерью и ребенком через грудное вскармливание. Ранее мы обнаружили, что мРНК, доставляемая из одной тучной клетки в другую посредством экзосомального челнока, является функциональной [20]. Однако возможно, что экзосомальная микроРНК может иметь расширенную способность воздействовать на реципиентную клетку посредством РНК-интерференции [26]. В нескольких исследованиях онкологических больных также было показано, что экзосомы плазмы и/или подобные везикулы содержат РНК [21, 27, 28]. Предполагается, что содержание РНК в экзосомах может быть использовано в качестве биологических маркеров при различных заболеваниях. Однако для достижения этой цели потребуется обширная характеристика экзосомальной РНК при различных заболеваниях, а также у здоровых людей.
В экзосомах из плазмы мы могли обнаружить присутствие мРНК, подтверждая наше предыдущее исследование, показывающее присутствие мРНК в экзосомах тучных клеток [20], а также подтверждая исследования, показывающие присутствие мРНК в экзосомах из человеческих образцов, таких как слюна и плазма [23, 28]. Несмотря на использование того же метода, в текущем исследовании не удалось идентифицировать мРНК в слюне человека и экзосомах грудного молока. Важно отметить, что выход РНК, выделенной из экзосом, существенно различается, что сильно подчеркивает необходимость оптимизации и стандартизации выделения экзосомальной РНК, что затем позволило бы сравнивать различные исследования экзосом.
Биологическое значение челнока РНК между клетками экзосомами было ранее определено в нашем первоначальном исследовании [20], которое показало, что тучные клетки человека могут поглощать экзосомы тучных клеток мыши и впоследствии продуцировать мышиные белки из мРНК, доставленной в экзосомы. Неясно, действительно ли биологически важный перенос РНК происходит в организме человека, но наше текущее исследование косвенно предполагает, что потенциал для такого механизма существует. Вполне вероятно, что наиболее интенсивное перемещение РНК будет происходить в микроокружении вокруг клеток, продуцирующих и высвобождающих РНК-содержащие экзосомы. Однако обнаружение РНК-содержащих экзосом в плазме подразумевает, что они, по крайней мере теоретически, могут доставлять РНК в отдаленные клетки.
Наше новое открытие РНК-содержащих экзосом в грудном молоке позволяет предположить, что эти экзосомы могут передавать генетические сигналы от матери к ребенку во время грудного вскармливания. Это увеличивает как сложность взаимодействия матери и ребенка, так и сложность функционирования экзосом. Грудное молоко обеспечивает много преимуществ для здоровья ребенка [29], но еще не было определено, может ли какой-либо такой эффект быть связан с содержанием экзосом в грудном молоке. Наблюдается один эффект экзосом грудного молока in vitro представляет собой индукцию Т-регуляторных (FOXP3-позитивных) клеток [12], что приводит к предположению, что экзосомы могут способствовать развитию у ребенка иммунологической толерантности.
Мы не можем игнорировать возможность того, что только субпопуляция экзосом слюны, плазмы и грудного молока содержит РНК, и потребуются обширные исследования, чтобы точно определить, какие клетки продуцируют экзосомы, содержащие функциональную РНК. Клеточные источники экзосом в плазме и грудном молоке человека неясны, но изолированные экзосомы, скорее всего, высвобождаются смесью иммунокомпетентных клеток, присутствующих в жидкости, и эпителиальных клеток [2, 3, 7]. Происхождение экзосом слюны также не установлено, но было показано, что первичные культуры слюнных желез могут высвобождать экзосомы [30], что свидетельствует о том, что экзосомы слюны по крайней мере частично происходят из эпителиальных клеток слюнных желез.
Выводы
Мы подтвердили наличие РНК в экзосомах человеческой плазмы, слюны и грудного молока и задокументировали, что экзосомы из человеческой слюны и грудного молока могут поглощаться клетками человека. Поскольку экзосомы могут доставлять свою РНК в клетки-реципиенты, мы предполагаем, что экзосомы человека могут доставлять функциональные генетические сигналы другим клеткам. Обнаружение РНК-содержащих экзосом в слюне и грудном молоке предполагает, что перенос РНК через экзосомы может происходить между людьми во время поцелуев или грудного вскармливания.
Ссылки
1. Théry C, Zitvogel L, Amigorena S: Экзосомы: состав, биогенез и функция. Нат Рев Иммунол. 2002, 2: 569-579.
  ПабМед Google ученый
2. Théry C, Regnault A, Garin J, Wolfers J, Zitvogel L, Ricciardi-Castagnoli P, Raposo G, Amigorena S: Молекулярная характеристика экзосом, полученных из дендритных клеток: селективное накопление белка теплового шока hsc73. Джей Селл Биол. 1999, 147: 599-610.
  Центральный пабмед Статья пабмед Google ученый
3. Raposo G, Nijman HW, Stoorvogel W, Liejendekker R, Harding CV, Melief CJM, Geuze HJ: B-лимфоциты секретируют антигенпрезентирующие везикулы. J Эксперт Мед. 1996, 183: 1161-1172. 10.1084/ем.183.3.1161.
  КАС Статья пабмед Google ученый
4. Blanchard N, Lankar D, Faure F, Regnault A, Dumont C, Raposo G, Hivroz C: Активация TCR человеческих Т-клеток индуцирует продукцию экзосом, несущих комплекс TCR/CD3/ζ. Дж Иммунол. 2002, 168: 3235-3241.
  КАС Статья пабмед Google ученый
5. Raposo G, Tenza D, Mecheri S, Peronet R, Bonnerot C, Desaymard C: Накопление молекул главного комплекса гистосовместимости класса II в секреторных гранулах тучных клеток и их высвобождение при дегрануляции. Мол Биол Селл. 1997, 8: 2631-2645.
  Центральный пабмед КАС Статья пабмед Google ученый
6. Wolfers J, Lozier A, Raposo G, Regnault A, Théry C, Masurier C, Flament C, Pouzieux S, Faure F, Tursz T: Опухолевые экзосомы являются источником общих антигенов отторжения опухоли для перекрестного примирования ЦТЛ. Нат Мед. 2001, 7: 297-303. 10.1038/85438.
  КАС Статья пабмед Google ученый
7. Van Niel G, Raposo G, Candalh C, Boussac M, Hershberg R, Cerf-Bensussan N, Heyman M: Эпителиальные клетки кишечника секретируют экзосомоподобные везикулы. Гастроэнтерология. 2001, 121: 337-349. 10.1053/гаст.2001.26263.
  Артикул Google ученый
8. Caby MP, Lankar D, Vincendeau-Scherrer C, Raposo G, Bonnerot C: Экзосомальноподобные везикулы присутствуют в плазме крови человека. Инт Иммунол. 2005, 17: 879-887. 10.1093/интимм/dxh367.
  КАС Статья пабмед Google ученый
9. Писиткун Т., Шен Р.Ф., Неппер М.А.: Идентификация и протеомное профилирование экзосом в моче человека. ПНАС. 2004, 101: 13368-13373. 10.1073/пнас.0403453101.
  Центральный пабмед КАС Статья пабмед Google ученый
10. «>
  Andre F, Schartz NEC, Movassagh M, Flament C, Pautier P, Morice P, Pomel C, Lhomme C, Escudier B, Le Chevalier T: Злокачественные выпоты и экзосомы, полученные из иммуногенных опухолей. Ланцет. 2002, 360: 295-305. 10.1016/S0140-6736(02)09552-1.
  КАС Статья пабмед Google ученый
11. Skriner K, Adolph K, Jungblut PR, Burmester GR: Ассоциация цитруллинированных белков с синовиальными экзосомами. Ревмирующий артрит. 2006, 54: 3809-3814. 10.1002/ст.22276.
  КАС Статья пабмед Google ученый
12. Admyre C, Johansson SM, Qazi KR, Filen JJ, Lahesmaa R, Norman M, Neve EPA, Scheynius A, Gabrielsson S: Экзосомы с иммуномодулирующими свойствами присутствуют в грудном молоке человека. Дж Иммунол. 2007, 179:1969-1978.
  КАС Статья пабмед Google ученый
13. «>
  Admyre C, Grunewald J, Thyberg J, Gripenbäck S, Tornling G, Eklund A, Scheynius A, Gabrielsson S: Экзосомы с главным комплексом гистосовместимости класса II и костимулирующими молекулами присутствуют в БАЛ человека. Eur Respir J. 2003, 22: 578-583. 10.1183/0
  36.03.00041703.
  КАС Статья пабмед Google ученый
14. Gatti J-L, Métayer S, Belghazi M, Dacheux F, Dacheux J-L: Идентификация, протеомное профилирование и происхождение экзосомоподобных везикул в эпидидимальной жидкости барана. Биол Репрод. 2005, 72: 1452-1465. 10.1095/биолреппрод.104.036426.
  КАС Статья пабмед Google ученый
15. Огава Ю., Канай-Адзума М., Акимото Ю., Каваками Х., Яношита Р. Экзосомоподобные везикулы с дипептидилпептидазой IV в слюне человека. Биол Фарм Бык. 2008, 31: 1059-1062. 10.1248/бпб.31.1059.
  КАС Статья пабмед Google ученый
16. «>
  Chaput N, Schartz NEC, Andre F, Zitvogel L: Экзосомы для иммунотерапии рака. Adv Exp Med Biol. 2003, 532: 215-221.
  КАС Статья пабмед Google ученый
17. Морс М.А., Гарст Дж., Осада Т., Хан С., Хобейка А., Клэй Т.М., Валенте Н., Шринивас Р., Саттон М.А., Делкейр А.: Фаза I исследования иммунотерапии декзосомами у пациентов с развитой немелкоклеточной болезнью легких рак. J Transl Med. 2005, 3:9-10.1186/1479-5876-3-9.
  Центральный пабмед Статья пабмед Google ученый
18. Темчура В.В., Тенбуш М., Нчинда Г., Наби Г., Типплер Б., Зеленюк М., Вилднер О., Уберла К., Куате С.: Усиление иммуностимулирующих свойств экзосомальных вакцин за счет включения слитого компетентного G-белка вируса везикулярного стоматита . вакцина. 2008, 26: 3662-3672. 10.1016/j.vaccine.2008.04.069.
  КАС Статья пабмед Google ученый
19. «>
  Parolini I, Federici C, Raggi C, Lugini L, Palleschi S, De Milito A, Coscia C, Iessi E, Logozzi MA, Colone M: рН микросреды является ключевым фактором для движения экзосом в опухолевых клетках. Дж. Биол. Хим. 2009, 284: 34211-34222. 10.1074/jbc.M109.041152.
  Центральный пабмед КАС Статья пабмед Google ученый
20. Valadi H, Ekström K, Bossios A, Sjöstrand M, Lee JJ, Lötvall JO: Опосредованный экзосомами перенос мРНК и микроРНК представляет собой новый механизм генетического обмена между клетками. Nat Cell Biol. 2007, 9: 654-659. 10.1038/ncb1596.
  КАС Статья пабмед Google ученый
21. Taylor DD, Gercel-Taylor C: Сигнатуры микроРНК экзосом опухолевого происхождения как диагностические биомаркеры рака яичников. Гинекол Онкол. 2008, 110: 13-21. 10.1016/ж.ыгыно.2008.04.033.
  КАС Статья пабмед Google ученый
22. «>
  Michael A, Bajracharya SD, Yuen PST, Zhou H, Star RA, Illei GG, Alevizos I: Экзосомы из слюны человека как источник биомаркеров микроРНК. Оральный Дис. 2010, 16: 34-38. 10.1111/j.1601-0825.2009.01604.х.
  Центральный пабмед КАС Статья пабмед Google ученый
23. Паланисами В., Шарма С., Дешпанде А., Чжоу Х., Гимзевски Дж., Вонг Д.Т.: Наноструктурный и транскриптомный анализ экзосом, полученных из человеческой слюны. ПЛОС ОДИН. 2010, 5: e8577-10.1371/journal.pone.0008577.
  Центральный пабмед Статья пабмед Google ученый
24. Морелли А.Е., Ларрегина А.Т., Шуфески В.Дж., Салливан М.Л.Г., Штольц Д.Б., Папворт Г.Д., Загорчак А.Ф., Логар А.Дж., Ван З., Уоткинс С.К.: Эндоцитоз, внутриклеточная сортировка и обработка экзосом дендритными клетками. 2004, 104: 3257-3266.
  Google ученый
25. «>
  Obregon C, Rothen-Rutishauser B, Gerber P, Gehr P, Nicod LP: Активное поглощение эпителиальными клетками экзовезикул, происходящих из дендритных клеток, вызывает высвобождение медиаторов воспаления через TNF-{альфа}-опосредованный путь. 2009, 175: 696-705.
  Google ученый
26. Lodish HF, Zhou B, Liu G, Chen CZ: Микроуправление иммунной системой с помощью микроРНК. Нат Рев Иммунол. 2008, 8: 120-130. 10.1038/nri2252.
  КАС Статья пабмед Google ученый
27. García JM, García V, Pena C, Domínguez G, Silva J, Diaz R, Espinosa P, Citores MJ, Collado M, Bonilla F: Внеклеточная плазменная РНК больных раком толстой кишки заключена в везикулоподобную структуру и обогащен мРНК. РНК. 2008, 14: 1424-1432.
  Центральный пабмед Статья пабмед Google ученый
28. «>
  Skog J, Würdinger T, van Rijn S, Meijer DH, Gainche L, Miguel S-E, Curry WT, Carter BS, Krichevsky AM, Breakefield XO: микровезикулы глиобластомы транспортируют РНК и белки, которые способствуют росту опухоли и обеспечивают диагностические биомаркеры. Nat Cell Biol. 2008, 10: 1470-1476. 10.1038/ncb1800.
  Центральный пабмед КАС Статья пабмед Google ученый
29. Крамер М.С., Чалмерс Б., Ходнетт Э.Д., Севковская З., Дзикович И., Шапиро С., Колле Дж.-П., Ванилович И., Мезень И., Дюкруэ Т.: Продвижение исследования по вмешательству в грудное вскармливание (ПРОБИТ): рандомизированное исследование в Республике Беларусь. 2001, 285: 413-420.
  Google ученый
30. Капсогеоргу Э.К., Абу-Хелу Р.Ф., Мутсопулос Х.М., Манусакис М.Н. Экзосомы эпителиальных клеток слюнных желез: источник аутоантигенных рибонуклеопротеинов. Ревмирующий артрит. 2005, 52: 1517-1521. 10.1002/ст.21005.
  КАС Статья пабмед Google ученый
Скачать ссылки
Благодарности
Мы благодарим банк крови при Сальгренской университетской больнице, Гетеборг, за получение крови. Мы также хотим поблагодарить всех доноров крови, слюны и грудного молока за их вклад. Линия тучных клеток человека, HMC-1, была любезно предоставлена G. Nilsson (Уппсальский университет). Это исследование финансировалось Шведским исследовательским советом (K2008-57X-20 676-01-3), Шведским фондом сердца и легких, Шведским фондом астмы и аллергии и Центром исследований астмы и аллергии VBG. Ян Лётвалл финансируется Фондом Германа Крефтинга против астмы/аллергии. Гетеборгский университет является частью GA 9, финансируемой ЕС.0398 2 Сеть передового опыта LEN.
Author information
Authors and Affiliations
1. Krefting Research Centre, Sahlgrenska Academy, University of Gothenburg, Box 424, 405 30, Gothenburg, Sweden
  Cecilia Lässer, Vesta Seyed Alikhani, Karin Ekström, Maria Eldh, Apostolos Bossios , Margareta Sjöstrand & Jan Lötvall
2. Медицинский факультет, отделение клинической аллергии, больница Каролинского университета Сольна, Стокгольм, Швеция
  Patricia Torregrosa Paredes & Susanne Gabrielsson
3. Dept. of Rheumatology and Inflammation Research, Sahlgrenska Academy, University of Gothenburg, Guldhedsgatan 10A, 413 46, Gothenburg, Sweden
  Hadi Valadi
Authors
1. Cecilia Lässer
  Посмотреть публикации автора
  Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
2. Веста Сейед Алихани
  Просмотр публикаций автора
  Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
3. Karin Ekström
  Просмотр публикаций автора
  Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
4. Maria Eldh
  Просмотр публикаций автора
  Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
5. Patricia Torregrosa Paredes
  Посмотреть публикации автора
  Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
6. Apostolos Bossios
  Просмотр публикаций автора
  Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
7. Margareta Sjöstrand
  Просмотр публикаций автора
  Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
8. Susanne Gabrielsson
  Посмотреть публикации автора
  Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
9. Jan Lötvall
  Просмотр публикаций автора
  Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
10. Hadi Valadi
  Просмотр публикаций автора
  Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Автор, ответственный за корреспонденцию
Ян Лётваль.
Дополнительная информация
Конкурирующие интересы
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов. JL, KE, AB, MS и HV являются совладельцами патента на использование экзосом в качестве векторов для генной терапии.
Вклад авторов
CL разработала и провела проточную цитометрию и работу с РНК для экзосом слюны и грудного молока, провела эксперименты по электронной микроскопии и вестерн-блоттингу для экзосом грудного молока, провела эксперименты по поглощению и подготовила рукопись; VSA провела проточную цитометрию и работу с РНК для экзосом плазмы и подготовила рукопись; К.Е. разработал проточную цитометрию, а также разработал и провел электронную микроскопию экзосом слюны и плазмы; ME и PTP провели работу с РНК для экзосом грудного молока; AB и MS участвовали в планировании и разработке эксперимента; SG предоставил информацию об экзосомах грудного молока; JL задумал исследование и участвовал в подготовке рукописи; HV разработал и скоординировал эксперименты и помог подготовить разделы рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.
Оригинальные файлы изображений, представленные авторами
Ниже приведены ссылки на оригинальные файлы изображений, представленные авторами.
Оригинальный файл авторов для рисунка 1
Оригинальный файл авторов для рисунка 2
Оригинальный файл авторов на рисунок 3
Оригинальный файл на рисунке 4
9000 2
7 Authorors ‘Origin файл для рисунка 5
Авторский файл для рисунка 6
Права и разрешения
Открытый доступ Эта статья опубликована по лицензии компании BioMed Central Ltd. Эта статья находится в открытом доступе и распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License ( https://creativecommons.org/licenses/by/2.0 ), который разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии надлежащего цитирования оригинальной работы.